骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(Bmp4)在鵝胚胎期皮膚及羽芽中的表達(dá)研究.pdf

1、鵝毛用處很多，尤其是鵝羽絨保暖性能好、蓬松度高，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。但多年來，人們只研究了營養(yǎng)成分對鵝毛生長的影響，一直缺乏對于鵝毛生長發(fā)育機(jī)理方面的探討。國外以雞作為模式動(dòng)物，發(fā)現(xiàn)Bmp4基因?qū)τ谟鹈纳L發(fā)育具有重要調(diào)控作用，因此本試驗(yàn)從鵝皮膚中克隆得到了Bmp4基因部分cDNA序列，并采用組織原位雜交技術(shù)，對Bmp4基因在鵝胚胎期皮膚及羽芽中表達(dá)部位的變化進(jìn)行了研究，初步判斷出了Bmp4基因?qū)τ邬Z皮膚及羽毛生長發(fā)育的作用。

2、 本試驗(yàn)包括連續(xù)的兩部分內(nèi)容，第一部分為序列比對分析。以11日胚齡鵝背部皮膚中提取的總RNA為模板，采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出鵝Bmp4基因部分cDNA序列。將所得cDNA克隆進(jìn)pGEM-T easy vector中，經(jīng)限制酶酶切鑒定后進(jìn)行測序。將測序結(jié)果與雞、大鼠、小鼠、人和黑猩猩的Bmp4核苷酸序列進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)多處突變。使用DNAMAN軟件進(jìn)行同源性比較，本試驗(yàn)所克隆的cDNA序列與雞、大鼠、小鼠、人和黑猩猩該基因相應(yīng)區(qū)段的同源性

3、分別為94.36％、79.69％、77.85％、78.35％和78.35％。將其轉(zhuǎn)換成氨基酸序列后發(fā)現(xiàn)鵝BMP4的氨基酸序列與其他物種也有多處不同。鵝BMP4氨基酸序列與雞、大鼠、小鼠、人和黑猩猩相應(yīng)區(qū)段的同源性分別為95.28％、87.04％、87.96％、87.16％和86.24％。推測它們之間序列的變化可能是造成禽類和哺乳類之間羽毛和毛發(fā)形態(tài)學(xué)差異，以及鵝羽絨形成的原因之一。 第二部分為組織原位雜交。采用體外轉(zhuǎn)錄方法，以連

4、接有Bmp4基因部分cDNA的線性化pGEM-T easy vector為模板，合成DIG標(biāo)記的cRNA探針。同時(shí)，分別取12、13和14胚齡鵝背、腹及胸部皮膚制備冰凍切片。經(jīng)過預(yù)雜交、雜交、雜交后洗脫以及顯色，發(fā)現(xiàn)Bmp4基因在鵝胚背、腹及胸部皮膚的表達(dá)規(guī)律基本相同，始終在表皮的上皮細(xì)胞中表達(dá)，推測Bmp4基因與鵝毛基板形成、羽芽形成及延伸有關(guān)，并進(jìn)而影響到羽毛的形成和分支。 本試驗(yàn)首次擴(kuò)增出鵝Bmp4基因部分cDNA序列，并