BMP4在小鼠神經(jīng)管畸形發(fā)生中的作用研究.pdf

1、本文研究目的：應(yīng)用全反式維甲酸(all-trans-retinoic acid，ATRA)誘導(dǎo)建立小鼠神經(jīng)管畸形(neuraltube defects，NTDs)動(dòng)物模型，研究骨形成蛋白4(Bone morphogenetic protein 4，BMP4)與受體的相互作用關(guān)系及其介導(dǎo)的信號(hào)通路對(duì)NTDs發(fā)生發(fā)展的影響，探討B(tài)MP4在ATRA致。NTDs中的可能作用機(jī)制。 研究方法：選取健康成熟昆明種小鼠，通過孕7.25-7.5

2、天(E7.25-7.5d)時(shí)一次性胃飼50mg/kgATRA誘導(dǎo)建立NTDs動(dòng)物模型，肉眼及解剖顯微鏡下觀察胎鼠畸形情況：通過半定量RT-PCR技術(shù)及原位雜交方法，檢測BMP4及其受體BMPR Ⅰ A、BMPR Ⅰ B、BMPR Ⅱ各基因在神經(jīng)管閉合過程不同階段的表達(dá)情況；應(yīng)用Western-blot方法對(duì)BMPs通路中的關(guān)鍵信號(hào)分子進(jìn)行檢測，并對(duì)其進(jìn)行綜合分析。 研究結(jié)果： 1．過量ATRA具有明顯的胚胎致畸性，可致孕

3、鼠子宮明顯充血淤血，造成無腦、脊柱裂等NTDs形態(tài)表現(xiàn)。 2．BMP4 mRNA在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組胚胎神經(jīng)管組織中的表達(dá)均存在時(shí)間依賴性，并呈現(xiàn)隨時(shí)間而逐漸降低的變化，其Ⅰ型受體BMPRⅠA在實(shí)驗(yàn)組胚胎神經(jīng)管閉合過程中呈現(xiàn)隨時(shí)間穩(wěn)步增高的趨勢，BMPRⅠB先增高后大幅降低，Ⅱ型受體BMPRⅡ在整體上表達(dá)較穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)高于對(duì)照組。 3．在神經(jīng)管閉合關(guān)鍵期，BMP4 mRNA主要表達(dá)于背側(cè)神經(jīng)上皮，且實(shí)驗(yàn)組水平高于對(duì)照

4、組。BMPs通路的信號(hào)分子p-Smadl蛋白表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)組中高于對(duì)照組，而抑制型Smad6蛋白則在實(shí)驗(yàn)組中低于對(duì)照組。 研究結(jié)論： 1．應(yīng)用外源性ATRA成功誘導(dǎo)建立了昆明種小鼠NTDs動(dòng)物模型，為研究NTDs發(fā)病機(jī)制奠定了重要的模型基礎(chǔ)。 2．BMP4在胚胎神經(jīng)管閉合過程中可能具有部分誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性，其Ⅰ型受體與Ⅱ型受體在ATRA致NTDs中的作用不容忽視，可能為參與NTDs發(fā)生的分子調(diào)控過程的主要因素。