細(xì)胞凋亡在神經(jīng)管畸形發(fā)生中作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　 應(yīng)用全反式維甲酸(All-trans retinoic acid，ATRA)誘導(dǎo)建立C57BL/6J小鼠神經(jīng)管畸形(Neural tube defects，NTDs)動物模型，研究凋亡在神經(jīng)管發(fā)育過程中的作用及其對NTDs發(fā)生發(fā)展的影響，探討凋亡在ATRA致NTDs中可能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 選取健康成年C57BL/6J小鼠，在懷孕至第8天以28mg/kg一次性灌胃大劑量ATRA誘導(dǎo)建立

2、NTDs動物模型，MoticK系列體視顯微鏡下觀察胎鼠畸形情況；HE染色，OlympusSZX-1LLB200顯微鏡下拍照觀察胚胎神經(jīng)管橫斷面形態(tài)學(xué)改變；TUNEL(TdT-mediatex-dUTP Nick End Labeling，TUNEL)技術(shù)，檢測E11.5d時NTDs實驗組與對照組凋亡情況；Image-pro plus軟件對所取圖像進(jìn)行圖像分析、測定陽性染色平均光密度(mean opticaldensity，MOD)及陽性

3、染色面積率，計算細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index，AI)；免疫組化檢測caspase-3、-6、-9表達(dá)，對照組與NTDs實驗組數(shù)據(jù)的處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗，并對其進(jìn)行綜合分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.過量ATRA具有明顯的胚胎致畸性，可致孕鼠子宮明顯充血淤血，造成無腦、脊柱裂等NTDs形態(tài)表現(xiàn)。
　　 2.TUNEL陽性信號為綠色熒光，對照組組織細(xì)胞只有少量凋亡

4、細(xì)胞，而NTDs實驗組組織細(xì)胞濃度減少，凋亡細(xì)胞明顯增多。
　　 3. NTDs實驗組與對照組神經(jīng)細(xì)胞凋亡caspase-3、-6、-9蛋白表達(dá)量存在明顯差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.應(yīng)用ATRA成功誘導(dǎo)建立C57BL/6J小鼠神經(jīng)管畸形動物模型，為研究NTDs發(fā)病機(jī)制奠定了重要模型基礎(chǔ)。
　　 2.凋亡在神經(jīng)管閉合中發(fā)揮一定作用，可能由于過度凋亡導(dǎo)致參與關(guān)鍵形態(tài)部位形成的細(xì)胞數(shù)量不足，而使神經(jīng)管閉合不