肺炎衣原體在HEp-2細胞中的發(fā)育周期及其感染對細胞遷移的影響.pdf

1、目的： 研究肺炎衣原體(Chlamdia pneumonia，C.pn)在體外培養(yǎng)中的增殖規(guī)律，了解其超微結(jié)構(gòu)的變化，探討C.pn在體外連續(xù)培養(yǎng)的方法；觀察C.pn感染大鼠血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)及人喉癌細胞(HumanEpidermoid Carcinoma-2，HEp-2)后，對細胞遷移能力的改變。 方法： 1.C.pn感染HEp-2細胞，光鏡下觀察細

2、胞病變，并用PCR技術(shù)鑒定其核酸。 2.熒光顯微鏡下觀察感染24h、48h和72h后C.pn在HEp-2細胞內(nèi)的形態(tài)變化。 3.透射電鏡下觀察感染24h、48h和72h后C.pn在HEp-2細胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)變化。 4.應(yīng)用組織培養(yǎng)半數(shù)感染量法測定C.pn感染導致HEp-2細胞病變程度。 5.應(yīng)用MTT法檢測C.pn感染VSMC、HEp-2細胞后，細胞活力的改變。 6.應(yīng)用MTT法觀察C.pn感染對

3、VSMC、HEp-2細胞粘附能力的影響。 7.應(yīng)用Wound-healing assay和Transwell assay觀察C.pn感染對VSMC、HEp-2細胞遷移能力的影響。 結(jié)果： 1.在感染24～72h后，光鏡下可見HEp-2細胞腫脹、脫落；在感染24h后，包涵體始見于HEp-2細胞胞漿內(nèi)，至72h占據(jù)整個胞漿。PCR擴增出C.pn437bp的特異性片段。 2.熒光顯微鏡顯示在不同時間點包涵體內(nèi)由

4、原體向網(wǎng)狀體，而后再轉(zhuǎn)變?yōu)樵w的衍變過程。 3.透射電鏡下觀察到相似結(jié)果，并可見梨形原體及微型小體等C.pn特征性的超微結(jié)構(gòu)。 4.與感染后84h、96h相比，感染后72h收集HEp-2細胞可獲得高感染性的子代C.pn。 5.C.pn感染可以顯著增強體外培養(yǎng)的VSMC、HEp-2細胞的活力，其最高增殖率分別達到171.54％、43.63％。 6.C.pn感染可顯著增加VSMC、HEp-2細胞粘附于I型膠原