L-聚組氨酸抑制LPS引起的豬精子凋亡及其對(duì)精液品質(zhì)的影響.pdf

1、豬精液液態(tài)保存是人工授精技術(shù)的基礎(chǔ)，在精液液態(tài)保存過(guò)程中，精液中細(xì)菌溶菌產(chǎn)生的脂多糖(LPS)不僅能降低精液品質(zhì)、縮短精子壽命、誘導(dǎo)精子凋亡，而且還能隨著輸精進(jìn)入母畜生殖道內(nèi)引起母畜生殖道免疫反應(yīng)，造成生殖道免疫細(xì)胞極增而吞噬精子。L-聚組氨酸(L-pHis)能與LPS結(jié)合，但其能否抑制LPS對(duì)精子凋亡的影響尚未見報(bào)道。本研究中，通過(guò)向豬精液中添加L-pHis，檢測(cè)其對(duì)豬精液細(xì)菌濃度、LPS濃度、精液品質(zhì)是否造成影響，以及能否降低豬精子

2、的凋亡率，并初步闡釋其作用機(jī)制。
　　研究中共收集24頭公豬的精液，每4～5個(gè)個(gè)體的精液混合形成5個(gè)樣本池(n=5)，用BTS稀釋液稀釋至密度為4×106/mL，然后將精液液態(tài)保存(17℃)和37℃進(jìn)行試驗(yàn)。首先在0、6、12、36、72、120h測(cè)定精液稀釋后液態(tài)保存過(guò)程中精液中細(xì)菌菌落濃度以及精漿中LPS濃度隨時(shí)間的變化;然后以稀釋精液為對(duì)照組，分別添加多粘菌素B(PMB)至PMB濃度為100μg/mL為PMB組，L-聚組氨酸

3、(L-pHis)至L-pHis為100μg/mL為L(zhǎng)-聚組氨酸組，液態(tài)保存下于0、6、12、36、72、120h檢測(cè)三個(gè)組中細(xì)菌濃度、LPS濃度、精液品質(zhì)（精子活率、精子活力指數(shù)、運(yùn)動(dòng)速率）和精子的凋亡率，37℃保存下于0、1、3、6、9、12、24h檢測(cè)三個(gè)組中精液品質(zhì)（精子活率、精子活力指數(shù)、運(yùn)動(dòng)速率）和凋亡率;最后通過(guò)添加2μg/mL Anti-CD14于精液中，阻斷LPS-TLR4的結(jié)合，初步闡釋L-pHis抑制LPS誘導(dǎo)精子凋

4、亡的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明:(1)豬精液在液態(tài)保存過(guò)程中，細(xì)菌濃度從36h開始迅速增加，36h(4980±381.58 CFU/mL)、72h（12920±2833.66 CFU/mL）、120h(40020±4755.38 CFU/mL)細(xì)菌濃度持續(xù)顯著增加(P＜0.05)，細(xì)菌平均濃度達(dá)到1.02×104 CFU/mL;精液LPS濃度隨保存時(shí)間無(wú)顯著性變化(P＞0.05)，其平均濃度達(dá)到4.70±0.21 EU/mL。(2)在精液稀

5、釋液中添加100μg/mL L-pHis或100μg/mL PMB對(duì)液態(tài)精液保存中LPS的濃度沒(méi)有顯著影響(P＞0.05)，但是它們能提高在液態(tài)保存和37℃下精液品質(zhì)（精子活力指數(shù)、精子速率、精子活率）和降低精液細(xì)菌濃度。(3)液態(tài)保存和37℃保存下在精液稀釋液中添加100μg/mL L-pHis和100μg/mL PMB均能顯著抑制精子凋亡(P＜0.05)，但PMB抑制精子凋亡能力優(yōu)于L-pHis(P＜0.05)。(4) L-pHis