L-組氨酸高產(chǎn)菌株的選育及條件優(yōu)化.pdf

1、L-組氨酸是一種含咪唑核的堿性氨基酸，為了提高我國 L-組氨酸的產(chǎn)量，本文分別從自然界以及實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌種篩選，對(duì)篩選到的產(chǎn)生菌進(jìn)行物理化學(xué)誘變處理，對(duì)處理后的菌株進(jìn)行篩選，對(duì)得到的高產(chǎn)菌株進(jìn)行了發(fā)酵條件的優(yōu)化。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴對(duì)L-組氨酸的測定方法進(jìn)行了研究，通過試驗(yàn)和比較利用紙層析法定性測定L-組氨酸，利用比色法快速定量測定L-組氨酸。⑵主要從自然界的土壤、中溫曲、高溫曲以及實(shí)驗(yàn)室中篩選 L-組氨酸產(chǎn)生菌，在菌種的初

2、篩過程中，采用紙層析法進(jìn)行定性分析和確定，利用Pauly比色法對(duì)初步確定的L-組氨酸產(chǎn)生菌進(jìn)行復(fù)篩，最終從初篩菌種中分離得到了一株遺傳性狀穩(wěn)定產(chǎn)量較高的菌株，為枯草芽孢桿菌桿菌Y—7，作為下一步誘變育種的出發(fā)菌株。⑶以枯草芽孢桿菌Y—7為出發(fā)菌株，采用離子注入法以90個(gè)單位，每單位注入量為2.5×1013/cm3的N+和紫外線以及氯化鋰和硫酸二乙酯等進(jìn)行物理化學(xué)復(fù)合誘變。對(duì)誘變后的菌株進(jìn)行篩選和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，最終獲得一株產(chǎn)量最高的突變株

3、Y-217(6-MPR，transketolase-，histidase-)，產(chǎn)酸量為2.57g/L，由原先的1.76g/L增長到2.57g/L。經(jīng)過6次傳代培養(yǎng)以及搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：6次傳代培養(yǎng)后菌株的L-組氨酸的產(chǎn)量沒有明顯的變化，由此看出菌株 Y-217具有良好的遺傳穩(wěn)定性。⑷對(duì)誘變后獲得的高產(chǎn)菌株Y—217的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面法對(duì)菌株的發(fā)酵條件進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化，得出最佳發(fā)酵條件為：豆餅粉1