非小細(xì)胞肺癌組織中Smad4，p21，uPA的表達(dá)及其相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的 肺癌(lung cancer)是當(dāng)今世界發(fā)病率增長最快和死亡率最高的惡性腫瘤之一。目前，盡管采用手術(shù)、放療和化療等治療措施，總的5年生存率仍低與15％。肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個多階段、多步驟、漸進(jìn)演化的過程，其機(jī)制十分復(fù)雜，現(xiàn)代分子生物學(xué)研究證明，惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常有關(guān)，是惡性腫瘤形成的重要機(jī)制之一。于是，細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與癌變的關(guān)系引起人們的廣泛注意，成為目前分子生物學(xué)一個新的研究熱點。因此，研究細(xì)胞信

2、號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常與腫瘤發(fā)生、演進(jìn)的關(guān)系對深入了解腫瘤的發(fā)病學(xué)十分重要，對開辟腫瘤治療新方法和提高治愈率有重要的現(xiàn)實意義和廣闊的前景。 Smad4基因又名DPC4(deleted in pancreatic carcinoma locus 4)基因，是一種腫瘤抑制基因。其編碼的Smad4蛋白的主要作用是參與轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factorβ，TGF-β)超家族的信號在細(xì)胞內(nèi)的傳導(dǎo)。Smad4是TGF-

3、β轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起瓶頸作用的關(guān)鍵因子，幾乎所有的生物學(xué)效應(yīng)均是Smad4相互作用的結(jié)果，已發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中低表達(dá)或缺失表達(dá)，與腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系，可能作為腫瘤治療的新靶點。p21的基因產(chǎn)物是一種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制蛋白，有研究表明p21參與細(xì)胞分化、老化等生物學(xué)過程，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制凋亡等生物學(xué)功能，有數(shù)據(jù)表明p21可能是Smad4的靶基因。p21可能參與了TGFβ信號系統(tǒng)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡的功能。尿激酶型血漿纖溶酶原激活因子

4、(urokinase-type plasminogen activator，uPA)是一種重要的蛋白水解酶，它可以把纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白溶酶。uPA通過降解細(xì)胞外基質(zhì)，使組織結(jié)構(gòu)改變、細(xì)胞移動。uPA在促進(jìn)腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中起核心作用。許多研究提示uPA成為腫瘤預(yù)后的一個判斷指標(biāo)。目前關(guān)于Smad4蛋白在肺癌中表達(dá)的報道較少，其與肺癌臨床病理特征的關(guān)系尚無公認(rèn)的結(jié)論。本實驗采用免疫組織化學(xué)法檢測了60例非小細(xì)胞肺癌組織中Smad

5、4蛋白、p21蛋白及uPA蛋白的表達(dá)及相關(guān)性，旨在研究其在肺癌發(fā)生、發(fā)展中的意義，為肺癌的診斷和治療提供理論依據(jù)。 材料與方法 實驗組為手術(shù)切除并經(jīng)病理證實的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本60例，其中男性44例，女性16例：年齡35-77歲，平均60歲；均為非小細(xì)胞肺癌：39例鱗癌，21例腺癌，據(jù)組織學(xué)腫瘤分級，高分化17例、中分化20例，低分化23例；據(jù)臨床病理分期(TNM)：Ⅰ期20例，Ⅱ期13例，Ⅲ期14例，Ⅳ期13例；有淋巴結(jié)

6、轉(zhuǎn)移35例。所有病例均未經(jīng)放、化療及免疫治療。30例癌旁正常肺組織做為對照。標(biāo)本用10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，制成厚4μm的切片，采用免疫組化S-P(Streptavidin-Peroxidase,S-P)法和蘇木素-伊紅(HE)染色。結(jié)果用SPSS11.0統(tǒng)計軟件分析，Smad4、uPA和p21陽性率比較用x<'2>檢驗或Fisher精確概率法，相關(guān)分析采用spearman等級相關(guān)方法，以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果

7、 1.肺癌組織中Smad4蛋白的陽性表達(dá)率為65.0％，明顯低于癌旁正常肺組織的90.0％，比較有顯著性差異(P<0.05)；Smad4蛋白在肺癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡、組織類型均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。Smad4蛋白的陽性表達(dá)率隨肺癌細(xì)胞分化程度的降低而呈下降趨勢，高分化組、中分化組、低分化組分別為94.1％、70.0％、39.1％。高分化組與中分化組比，較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，低分化組與高分化組、中分化組比較

8、有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Smad4蛋白在肺癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，陽性表達(dá)率分別為51.4％、84.0％，兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)(P<0.05)。根據(jù)TNM分期，Smad4蛋白在肺癌Ⅰ+Ⅱ期中的表達(dá)明顯高于Ⅲ+Ⅳ期，陽性表達(dá)率分別為78.8％、48.1％，兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 2.肺癌組織中p21陽性表達(dá)率為68.3％，明顯高于癌旁正常肺組織陽性表達(dá)率為6.7％，比較有顯著性差異(P

9、<0.05)；p21蛋白在肺癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡、組織類型、疾病分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理因素均無相關(guān)性(P>0.05)。 3.肺癌組織中uPA陽性表達(dá)率為78.3％，明顯高于癌旁正常肺組織陽性表達(dá)率為0.0％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；uPA蛋白在肺癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡、組織類型均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。uPA蛋白的陽性表達(dá)率隨肺癌細(xì)胞分化程度的降低而呈升高趨勢，高分化組、中分化組、低分化組分別為5

10、2.9％、80.0％、95.7％。高分化組與中分化組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，高分化組與低分化組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，中分化組與低分化組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。uPA蛋白在肺癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，陽性表達(dá)率分別為100％、48.0％，兩組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。根據(jù)TNM分期，uPA蛋白在肺癌Ⅰ+Ⅱ期中的表達(dá)明顯低于Ⅲ+Ⅳ期，陽性表達(dá)率分別為66

11、.7％、92.6％，兩組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 4.在非小細(xì)胞肺癌組織中Smad4蛋白表達(dá)與p21蛋白陽性表達(dá)呈正相關(guān)，與uPA蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論 1.Smad4在NSCLC組織中表達(dá)的下調(diào)及p21，uPA表達(dá)的上調(diào)與NSCLC的發(fā)生密切相關(guān)，并且Smad4的低表達(dá)和uPA的高表達(dá)與分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示Smad4的低表達(dá)和uPA的高表達(dá)與NSCLC的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)。