肝細(xì)胞癌組織中Smad4,P21蛋白的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景與目的：原發(fā)性肝癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)為我國常見惡性腫瘤之一,在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中其死亡率僅次于胃癌和食管癌,列第三位。其發(fā)病機(jī)制尚未明確,對(duì)肝癌的治療仍限于手術(shù)切除、局部放化療等,其五年存活率非常低。因此探討肝癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療方法顯得異常重要。在原發(fā)性肝癌中肝細(xì)胞性肝癌(hepatic cell carcinoma,HCC)占90％以上。HCC的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多階段

2、、多步驟、漸進(jìn)演化的過程,機(jī)制十分復(fù)雜,現(xiàn)代分子生物學(xué)研究證明,惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常有關(guān),研究二者之間的關(guān)系為腫瘤治療及預(yù)防帶來新的手段。近年研究發(fā)現(xiàn)TGF-β轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常在HCC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,而該通路中起中樞作用的因子是Smad4,又稱為胰腺癌缺失基因(deleted in pancreaticcarcinoma locus4,DPC4),該基因在多種腫瘤中扮演抑癌基因的角色。P21為首先發(fā)現(xiàn)的廣譜細(xì)胞周

3、期蛋白依賴的蛋白激酶抑制物(cyclin-dependent kinaseinhibitor,CDKI)之一,能廣泛抑制G1期、S期cyclinCDK復(fù)合物的磷酸化激酶活性,有研究表明P21可能為Smad4調(diào)控的下游基因,二者共同通過TGFβ轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。本文通過觀察癌與癌旁組織中Smad4蛋白、P21蛋白的表達(dá)以及二者與HCC臨床病理特征之間的聯(lián)系,初步探討Smad4、P21基因在HCC發(fā)生中的可能作用機(jī)制。
　

4、　材料與方法：經(jīng)臨床手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的HCC組織標(biāo)本60例,其中男性39例,女性21例;年齡14-74歲,平均年齡(51±12.80)歲;均為原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌;據(jù)腫瘤組織學(xué)分級(jí),高分化13例,中分化38例,低分化9例;有轉(zhuǎn)移14例,無轉(zhuǎn)移46例(轉(zhuǎn)移包括肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝外轉(zhuǎn)移)。所有病例均未經(jīng)放療、化療及免疫治療。另取20例性別與年齡構(gòu)成與上述無顯著差異的癌旁肝組織做對(duì)照。所有標(biāo)本組織均經(jīng)過常規(guī)10％的甲醛溶液固定,石蠟包埋

5、,4μm厚連續(xù)切片。載玻片經(jīng)泡酸、高溫滅菌、多聚賴氨酸涂片處理。采用免疫組化二步法,具體步驟參照試劑盒說明。用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。以已知Smad4及P21陽性切片作為陽性對(duì)照。
　　結(jié)果：采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。肝癌與癌旁肝組織Smad4蛋白和P21蛋白陽性率比較用卡方檢驗(yàn)或精確概率法,相關(guān)分析采用spearman等級(jí)相關(guān)分析,以P<0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果1.60例肝細(xì)胞癌組織中,22例Sm

6、ad4表達(dá)陽性,陽性表達(dá)率為33.7％,20例癌旁組織中Smad4有16例陽性,陽性表達(dá)率為80.0％,肝癌組與癌旁組表達(dá)有顯著性差異(P<0.05)。2.Smad4蛋白在肝癌中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤直徑大小、術(shù)前甲胎蛋白水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。但其陽性表達(dá)率隨肝癌分化程度的降低而呈下降趨勢(shì),高、中、低分化組分別為92.3％、23.7％、11.1％。高、中分化組與高、低分化組比較有顯著性差異(P<0.05),中、低分化組

7、比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Smad4蛋白在肝癌伴有轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)低于無轉(zhuǎn)移組,陽性表達(dá)率分別為7.1％、45.7％。兩組間比較有顯著性差異(P<0.05)。3.60例肝細(xì)胞癌組織中,25例P21表達(dá)陽性,陽性表達(dá)率為41.7％,20例癌旁組織中P21有14例陽性,陽性表達(dá)率為70.0％,肝癌組與癌旁組表達(dá)有顯著性差異(P<0.05)。4.P21蛋白在肝癌中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤直徑大小、組織學(xué)分級(jí)、有無轉(zhuǎn)移、術(shù)前甲胎蛋白

8、水平無明顯相關(guān)性(P>0.05)。5.肝癌組織中Smad4和P21的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.69,P<0.01)。
　　結(jié)論：1.Smad4和P21在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中較癌旁肝組織呈現(xiàn)低表達(dá),二者參與肝細(xì)胞癌變。而且分化越差的癌組織,Smad4表達(dá)水平越低,提示Smad4有可能成為肝細(xì)胞癌發(fā)展的早期參考指標(biāo)。2.Smad4在伴有轉(zhuǎn)移的HCC組較無轉(zhuǎn)移組呈現(xiàn)低表達(dá),表明其可能與肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。3.Smad4和P21呈明顯正相關(guān),