非小細(xì)胞肺癌組織中Fbx4、CCND1及hTERT表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、肺癌已成為發(fā)病率和死亡率增長最快，嚴(yán)重危害人類健康和生命的惡性腫瘤。近年來研究發(fā)現(xiàn)：在惡性腫瘤中，泛素-蛋白酶體途徑(Ubiquitin-Proteasomepathway)發(fā)生異常是細(xì)胞獲得無限增殖性及永生性的原因之一。泛素-蛋白酶體途徑是一個新近受到關(guān)注的調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解與功能的重要系統(tǒng)。其主要作用于細(xì)胞內(nèi)一些半衰期短的調(diào)節(jié)蛋白和一些結(jié)構(gòu)異常、錯構(gòu)或受損傷的蛋白。其過程是以共價鍵形式聯(lián)結(jié)多個泛素(ubiquitin)分子，形成靶蛋白多

2、聚泛素鏈即泛素化(ubiquitination)后，再輸送到26S蛋白酶體上被消化降解。
　　 泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽，它通過三種泛素酶相互作用與目標(biāo)靶蛋白結(jié)合，從而引起靶蛋白的降解。這三種泛素酶分別是泛素激活酶(theubiquitin-activatingenzyme，E1)、泛素結(jié)合酶(ubiquitin-conjugatingenzyme，E2)和泛素連接酶(ubiquitinligase，E3)。E1利用A

3、TP激活泛素并把活化的泛素傳遞給E2，此時E2同E3結(jié)合，從而使泛素分子同底物相結(jié)合。
　　 SCFFbx4/αB-crystallin酶是E3酶中的重要一種，它由Skp1，Cull，F(xiàn)-box蛋白4(Fbx4)和αβ晶狀體蛋白(αβ-crystallin)組成，其中Fbx4蛋白是SCFFbx4/αB-crystallin酶的重要組成部分，它的二聚化作用可以調(diào)節(jié)SCFFbx4/αB-crystallin酶的活性，并且FBX4蛋白

4、作為一種底物特異性受體，而這個酶的剩余組件是不同底物反應(yīng)所通用的。最近研究發(fā)現(xiàn)FBX4過表達(dá)會引起CCND1泛素化從而促進(jìn)CCND1的代謝。如果SCFFbx4/αB-crystallill酶功能受損則會減弱CCND1泛素化，促進(jìn)CCND1過表達(dá)和加速細(xì)胞周期進(jìn)程從而有可能導(dǎo)致腫瘤的形成。于此觀點相一致的是，最近研究發(fā)現(xiàn)FBX4的表達(dá)量在一系列CCND1過表達(dá)的人類早期腫瘤細(xì)胞系中是降低的，這些腫瘤包括：前列腺癌，甲狀腺癌和乳腺癌。

5、>　　 細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1，CCND1)是G1周期素家族最重要的成員，為目前公認(rèn)的癌基因，它在人類食管癌癥、頭頸部的癌癥、乳腺癌中都被發(fā)現(xiàn)是過表達(dá)的，并且在一些癌癥中CCND1過表達(dá)被認(rèn)為是一種早期的，引起癌癥形成的事件。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)，是端粒酶核心組件之一，它在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中具有不可忽視的關(guān)鍵作用。
　　 在非小細(xì)

6、胞肺癌中關(guān)于CCND1和hTERT的表達(dá)量與患者重要的臨床病理學(xué)參數(shù)之間的相關(guān)性的已有報道，但是在非小細(xì)胞肺癌中關(guān)于fbx4表達(dá)量與患者重要的臨床病理學(xué)參數(shù)之間的相關(guān)性，與CCND1的表達(dá)量和hTERT的表達(dá)量之間的關(guān)系的研究仍未見報道。這個問題引起了廣泛的興趣，同時也是本實驗的研究目的。
　　 目的：為揭示Fbx4基因在肺癌中可能的作用機(jī)制和肺癌的發(fā)生進(jìn)展機(jī)制提供實驗依據(jù)。
　　 方法：實時熒光定量PCR(real-t

7、imePCR)檢測40例肺癌及其癌旁組織的Fbx4和CCND1的mRNA水平，用定性PCR檢測hTERT的mRNA水平。統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS16.0軟件完成，計量資料數(shù)據(jù)表示方式以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)，對所有計量資料均先進(jìn)行單樣本K-s正態(tài)分布檢驗，屬正態(tài)分布進(jìn)行t檢驗，如屬于非正態(tài)分布進(jìn)行非參數(shù)檢驗(秩和檢驗)。計數(shù)資料采用卡方檢驗，各組指標(biāo)間的相關(guān)性采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性意義。
　　 結(jié)果

8、：定性PCR結(jié)果顯示：hTERT只在肺癌組織中表達(dá)，在癌旁正常組織未見表達(dá)。與癌旁正常組織相比，肺癌組織明顯高表達(dá)(P<0.01)。Real-timePCR結(jié)果顯示：Fbx4在肺癌及癌旁正常組織組織內(nèi)均表達(dá)，但與癌旁正常組織相比，肺癌組織Fbx4表達(dá)略降低，沒有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。CCND1只在12例肺癌及癌旁組織檢出，其余28例肺癌及癌旁正常組織均未見CCND1表達(dá)，與癌旁正常組織相比，肺癌組織CCNDl表達(dá)下降，沒有顯