Smad4表達(dá)異常與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 研究結(jié)直腸組織Smad4 mRNA及其蛋白表達(dá)水平變化、Smad4基因CpG島異常甲基化與結(jié)直腸癌及其臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性。探討Smad4蛋白表達(dá)異常與結(jié)直腸腺瘤、腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。 方法： 所有結(jié)直腸癌病例均來自福建省立醫(yī)院2006.11-2007.05外科手術(shù)治療患者，結(jié)直腸癌主要指散發(fā)型，排除遺傳性非息肉病性大腸癌(HNPCC)及家族性結(jié)腸息肉病(FAP)癌變。結(jié)直腸腺瘤標(biāo)本取至福建省立醫(yī)院消化

2、內(nèi)鏡中心內(nèi)鏡下息肉切除術(shù)后標(biāo)本。詳細(xì)記錄病人性別、年齡及結(jié)直腸腫瘤易感因素。根據(jù)組織標(biāo)本取材部位和組織學(xué)類型，將實驗標(biāo)本分為四組，分別為： (1)腺癌組：標(biāo)本取自結(jié)直腸腺癌病灶處43例； (2)癌旁組：取結(jié)直腸腺癌患者的相應(yīng)遠(yuǎn)離癌灶的正常粘膜組織(癌旁組織，>5cm)43例； (3)腺瘤組：取腺瘤病灶處32例； (4)健康人黏膜組：取健康人結(jié)直腸黏膜組織12例。全部病例均經(jīng)手術(shù)和病理證實。采用RT-PCR

3、方法及測序、半定量RT-PCR方法檢測Smad4 mRNA及其表達(dá)水平變化；甲基化特異性PCR(MSP)技術(shù)檢測基因啟動子區(qū)甲基化程度；免疫組織化學(xué)方法檢測Smad4蛋白表達(dá)水平。應(yīng)用x2檢驗、t檢驗和Fisher確切概率法對實驗結(jié)果進(jìn)行綜合分析。 結(jié)果： 1.RT-PCR及測序結(jié)果顯示43例結(jié)直腸癌組織中有25例(58.14％)Smad4mRNA檢測到陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率低于相應(yīng)的癌旁組(38/43，88.37％)、

4、腺瘤組(29/32，90.63％)和健康人黏膜組(12/12，100.00％)，差異均有顯著性意義(P<0.05)。 2.半定量RT-PCR結(jié)果顯示43例結(jié)直腸癌組織中有25例Smad4 mRNA表達(dá)水平(0.63±0.25)，其表達(dá)水平低于相應(yīng)的癌旁組(0.95±0.29)、腺瘤組(1.01±0.37)和健康人黏膜組(1.18±0.33)，差異均有顯著性意義(P<0.05)。 3.MSP示Smad4基因啟動子甲基化陽性

5、率分別為60.52％、27.03％、37.50％和16.77％，結(jié)直腸癌組明顯高于健康人黏膜組和癌旁組織，差異均有顯著性意義(P<0.05)，但與腺瘤組差異無顯著性(P>0.05)。 4.免疫組化實驗顯示Smad4蛋白表達(dá)的陽性率分別為44.19％(19/43)，76.74％(33/43)、87.50％(28/32)、91.67％(11/12)，差異均有顯著性意義(P＜0.05)，并隨著浸潤深度加深和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，陽性率也隨之下降