δ-catenin在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與血管生成的相關(guān)性研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，在我國其發(fā)病率在逐年升高的趨勢。雖然隨著手術(shù)及相關(guān)診療技術(shù)的提高，結(jié)直腸癌患者的生存率有了很大提高，但病死率仍很高。導(dǎo)致結(jié)直腸癌患者死亡的主要原因是復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因此，充分的研究結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)及侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制，對降低結(jié)直腸癌的病死率有著重要作用。
　　δ-連環(huán)蛋白(δ-catenin)擁有10個犰狳(Armadillo，Arm)重復(fù)結(jié)構(gòu)，屬于連環(huán)蛋白家族的成員之一。很多研究證實δ-catenin與癌癥的

2、發(fā)生有著著密切的聯(lián)系。有報道證實，結(jié)直腸癌組織中δ-catenin的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖正相關(guān)。然而，結(jié)直腸癌組織中δ-catenin的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移是否相關(guān)仍無報道。
　　CD31又稱為血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子。在免疫組化中，CD31是主要用于證明內(nèi)皮細(xì)胞組織的存在，用于評估腫瘤血管生成，這可能意味著一個快速增長的腫瘤的程度。
　　在本研究中，我們檢測了60例CRC樣本中δ-catenin與CD31的表達(dá)情況并應(yīng)

3、用Western Blotting檢測結(jié)直腸癌及癌旁正常腸粘膜組織中δ-catenin及VEGF的蛋白和mRNA表達(dá)情況。
　　材料與方法：
　　一、標(biāo)本與病人資料
　　選取中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院2004-2010年的60例的結(jié)直腸癌患者標(biāo)本及10例的正常結(jié)直腸組織存檔蠟塊。其中男性32例，女性28例，年齡34-83歲（中位年齡60歲）。術(shù)前未接受放療和化療。以UICC的TNM病理分期第六版為標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期8例，Ⅱ期23

4、例，Ⅲ期22例，Ⅳ期7例。收入病例均為腺癌:其中高分化18例，中分化30例，低分化12例。我們還另外收集了20例新鮮結(jié)直腸癌及癌旁的正常腸粘膜組織（距癌灶最遠(yuǎn)端，至少距癌灶邊緣5cm以上）用于提取蛋白質(zhì)，標(biāo)本取出后立即放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　二、免疫組織化學(xué)染色
　　采用Streptavidin-Peroxidase(SP)免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行染色，檢測δ-catenin和CD31在60例的結(jié)直腸癌標(biāo)本中的表達(dá)及其與

5、各臨床病理因素之間的關(guān)系，并在高倍鏡(×400)下分別計數(shù)至少5個視野的微血管數(shù)，取其平均值作為每例的MVD。
　　三、蛋白免疫印跡(Western Blot)方法
　　將含50μg總蛋白的裂解產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳后，轉(zhuǎn)印至PVDF膜，單克隆抗體δ-catenin或小鼠抗人VEGF4℃孵育過夜，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育2小時后ECL顯色。
　　結(jié)果：
　　一、δ-catenin在結(jié)直腸癌組織中高表

6、達(dá)并與血管生成具有相關(guān)性
　　通過免疫組化實驗，我們檢測了60例的結(jié)直腸癌組織及10例的癌旁正常腸粘膜組織中δ-catenin及CD31的表達(dá)情況。δ-catenin陽性表達(dá)與腫瘤組織分化程度顯著相關(guān)。δ-catenin表達(dá)陽性的結(jié)直腸癌組織中MVD(44.86±8.74)顯著高于δ-catenin表達(dá)陰性的結(jié)直腸癌組織中的MVD(38.78±10.17)，二者之間有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　二、δ-catenin在結(jié)直腸癌組

7、織中表達(dá)上調(diào)，而且與腫瘤VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)
　　在20例結(jié)直腸癌組織中，δ-catenin和VEGF表達(dá)的相對灰度值分別1.03±0.20和0.82±0.23。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，二者表達(dá)水平具有顯著相關(guān)性(r=0.567，P=0.009)。我們的結(jié)果表明，δ-catenin在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，而且與腫瘤VEGF表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.δ-catenin在結(jié)腸癌中的異常表達(dá)與腫瘤血管生成正相關(guān)。