Fluvastatin抑制肺動(dòng)脈瓣內(nèi)皮細(xì)胞鈣化及其機(jī)制研究.pdf

1、背景:血管鈣化是礦物質(zhì)代謝失調(diào)在心血管系統(tǒng)的表現(xiàn)。它以病變的動(dòng)脈壁及瓣膜中大量鈣質(zhì)的沉積和骨樣組織形成為標(biāo)志性病理改變,動(dòng)脈瓣膜是最容易受累的部位。瓣膜鈣化最初被認(rèn)為是一種老年退行性病變,現(xiàn)已證實(shí)是一個(gè)主動(dòng)的炎癥、增生和生物礦化的過程。新生微血管和骨樣組織形成在瓣膜鈣化早期的特征性表現(xiàn)提示了血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子VEGF在瓣膜鈣化過程中的重要作用。
　　目的:探討VEGF是否能夠引起瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞鈣化及其可能的分子機(jī)制。
　　方

2、法:取原代培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈瓣內(nèi)皮細(xì)胞,VEGF作用后,以fura-2檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào);熒光顯微鏡下觀察VEGF刺激后GFP-NFAT融合蛋白的核轉(zhuǎn)位;real-time PCR檢測(cè) BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成相關(guān)基因的表達(dá);Von Kossa染色檢測(cè)細(xì)胞鈣化。
　　結(jié)果:100ng/ml VEGF的刺激激發(fā)了人肺動(dòng)脈瓣內(nèi)皮細(xì)胞中鈣振蕩的產(chǎn)生,頻率為0.3±0.03次/min

3、,波寬80±3.5S,并引起NFAT快速的核轉(zhuǎn)位。BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin的mRNA水平在刺激后6-24小時(shí)均顯著提高,并在48小時(shí)左右回落。刺激后72小時(shí),在培養(yǎng)單層細(xì)胞的基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)鈣化斑塊的出現(xiàn)。
　　結(jié)論:VEGF誘導(dǎo)瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞骨化相關(guān)基因的表達(dá),促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞鈣化;這種作用與VEGF激發(fā)瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞鈣振蕩,進(jìn)而引發(fā)NFAT活化及核轉(zhuǎn)位有關(guān)。
　　背景:Fluvas

4、tatin是一種他汀類藥物,是HMG-CoA還原酶的抑制劑,可通過與HMG-CoA還原酶的活性中心結(jié)合,阻斷甲羥戊酸代謝途徑,起到心血管保護(hù)作用。
　　目的:探討fluvastatin是否能夠抑制VEGF所造成的瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞鈣化及其與細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)間的關(guān)系。
　　方法:培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞以fluvastatin預(yù)先處理24小時(shí),再給予100ng/ml VEGF刺激,fura-2檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào);表達(dá)GFP-NFAT融合蛋白

5、的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察VEGF刺激后GFP-NFAT的核轉(zhuǎn)位;real-time PCR檢測(cè)BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成相關(guān)基因的表達(dá);Von Kossa染色檢測(cè)細(xì)胞鈣化。
　　結(jié)果:10nM fluvastatin的預(yù)處理抑制了瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞中鈣振蕩的產(chǎn)生及后繼的NFAT核轉(zhuǎn)位。BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成

6、相關(guān)基因的mRNA水平分別降低了(50.61±10.88)％,(82.23±22.11)％,(85.58±19.03)％和(85.57±8.42)％。VEGF刺激后72小時(shí),在培養(yǎng)單層細(xì)胞的基質(zhì)中未見鈣化斑塊。
　　結(jié)論:fluvastatin有效抑制了VEGF所引起的瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞鈣化,且這種作用是通過其抑制細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)依賴的NFAT信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn).
　　背景: GGPP是除膽固醇以外被statins阻斷的另一類異戊二烯。研

7、究提示statins的多種保護(hù)性藥理學(xué)作用均與對(duì)GGPP的合成阻斷,從而影響細(xì)胞中小G蛋白活性有關(guān)。
　　目的:探討fluvastatin抑制VEGF所致瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞鈣化的機(jī)制.
　　方法:培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞以GGPP和fluvastatin共同預(yù)處理24小時(shí),再給予100ng/ml VEGF刺激,fura-2檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào);表達(dá)NFAT-GFP融合蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察VEGF刺激后NFAT的核轉(zhuǎn)位;r

8、eal-time PCR檢測(cè)BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成相關(guān)基因的表達(dá);Von Kossa染色檢測(cè)細(xì)胞鈣化。
　　結(jié)果:10nM的GGPP和fluvastatin共同預(yù)處理后,VEGF仍然可以誘導(dǎo)瓣膜內(nèi)皮細(xì)胞中鈣振蕩的產(chǎn)生,頻率為0.074±0.02次/min,波寬65.7±8.8S,以及NFAT的核轉(zhuǎn)位。BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprote