Tiaml相互作用蛋白的篩選、鑒定及其功能的初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級博士學(xué)位論文Tiaml相互作用蛋白的篩選、鑒定及其功能的初步研究ScreeningandIdentificationofproteininteractingwithTiamlanditspreliminaryfunctionalstudies課題來源：國家自然科學(xué)基金(30801380，81101822)廣州市科技計劃重點項目(11C26090521)學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院黃靜陳龍華教授

2、腫瘤學(xué)專業(yè)學(xué)位全日制博士第一臨床醫(yī)學(xué)院2013年3月20日廣州中文摘要來開展的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制帶來了新的希望，而對蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能研究也成為當(dāng)前的研究熱點。Tiaml(TlymphomainvasionandInetaStasisl，T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移基因)蛋白是我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)的肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白。在前期研究中，我們通過對213例具有完整臨床隨訪資料的肝癌組織標(biāo)本進(jìn)行了免疫組織化學(xué)檢測，結(jié)果顯示：Tiaml在肝癌

3、組織中高表達(dá)，且表達(dá)水平與肝癌患者預(yù)后、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可以作為判斷肝癌患者預(yù)后的指標(biāo)。Tiaml在8種肝癌細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于人正常肝細(xì)胞株。我們以人原發(fā)性肝癌高、低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株(HCCLM6，MHCC97L)為研究對象，采用基因轉(zhuǎn)染和RNAi技術(shù)從細(xì)胞和動物水平證明了Tiaml過表達(dá)能促進(jìn)肝癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移，相反沉默內(nèi)源性Tiaml表達(dá)降低了肝癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力。研究結(jié)果為闡明肝癌轉(zhuǎn)移機(jī)制及尋找預(yù)測肝癌轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)志物提供了理

4、論依據(jù)。尋找Tiaml蛋白的相互作用蛋白是進(jìn)一步理解Tiaml蛋白功能的一個重要途徑。本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上，利用酵母雙雜交技術(shù)篩選Tiaml相互作用蛋白，為闡明肝癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)理，尋找腫瘤早期診斷和治療的靶標(biāo)提供重要理論依據(jù)。方法1酵母雙雜交篩選Tiaml相互作用蛋白11構(gòu)建酵母雙雜交誘餌表達(dá)載體首先應(yīng)用基因重組技術(shù)，以商品化的人TiamlcDNA克隆為模板，構(gòu)建Tiaml蛋白酵母表達(dá)質(zhì)粒pGBKT7Tiaml／C1199。將其轉(zhuǎn)