永生化人前軟骨干細(xì)胞株的生物學(xué)特性.pdf

1、目的：研究猿腎病毒40大T抗原基因永生化人前軟骨干細(xì)胞(IPSC)的生物學(xué)特性，探討其在骨軟骨瘤發(fā)生、增殖和轉(zhuǎn)移中的作用，從腫瘤干細(xì)胞的角度探討遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤的發(fā)生機(jī)制。
　　 方法：取人流產(chǎn)胎兒前軟骨干細(xì)胞(PSC)，利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將含有SV40Tag的質(zhì)粒pCMVSV40T/PUR轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的人前軟骨干細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選，陽(yáng)性克隆擴(kuò)大培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)，以及傳代復(fù)蘇的情況，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。用免疫

2、熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)IPSC中FGFR-3，用RT-PCR檢測(cè)IPSC中V40Tag和FGFR-3的表達(dá)。
　　 結(jié)果：培養(yǎng)后的永生化人前軟骨干細(xì)胞(IPSC)，形態(tài)與前軟骨干細(xì)胞(PSC)大體一致，傳代、凍存、復(fù)蘇對(duì)IPSC的存活率無(wú)影響,而第六代和第十代PSC的存活率降低(P<0.01)。與第六代和第十代PSC相比，IPSC增殖較旺盛，群體倍增時(shí)間短、增殖率較高(P<0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示IPSC的FGFR-3表達(dá)陽(yáng)性