經(jīng)血寧膠囊止血作用的相關(guān)藥效及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究經(jīng)血寧膠囊止血作用的相關(guān)藥效及其機(jī)制，比較經(jīng)血寧膠囊(醇提物)和經(jīng)血寧膠囊原劑型(水提物)兩者凝血作用的差異，為進(jìn)一步研究開發(fā)經(jīng)血寧膠囊新制劑提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.凝血試驗(yàn):(1)經(jīng)血寧膠囊對凝血時(shí)間(coagulationtime，CT)的影響(載玻片法和毛細(xì)玻管法);(2)經(jīng)血寧膠囊對新西蘭兔兔凝血酶時(shí)間(thrombintime，TT)、凝血酶原時(shí)間(prothrombintime，PT

2、)、活化部分凝血活酶時(shí)間(activatedpartialthromboplastintime，APTT)、纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)IB)的影響;(3)測定血小板計(jì)數(shù)(platelet，PLT)和血漿復(fù)鈣時(shí)間(plasmarecalcificationtime，PRT)，并與經(jīng)血寧膠囊原劑型比較，觀察兩者凝血作用的差異。
　　 2.對大鼠藥物性流產(chǎn)子宮出血的影響:(1)動(dòng)物子宮出血模型治療試驗(yàn):建立藥物性流產(chǎn)大鼠子宮

3、出血模型，觀察經(jīng)血寧膠囊對藥物性流產(chǎn)大鼠子宮出血總量以及子宮重量的影響;對大鼠子宮重量的影響;采用ELISA法測定大鼠前列腺素(PGF2a)及大鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平;用蘇木精一伊紅(HematoxylinandEosinStaining，HE)染色，光鏡下觀察子宮組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;(2)經(jīng)血寧膠囊對新西蘭兔離體子宮平滑肌收縮的影響。(3)經(jīng)血寧膠囊對新西蘭兔主動(dòng)脈血管舒縮功能影響的試驗(yàn)。
　　 3.抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn):(1)

4、經(jīng)血寧膠囊對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響試驗(yàn)(容積測量法)，計(jì)算足跖炎癥腫脹程度;(2)采用小鼠耳廓腫脹法，觀察經(jīng)血寧膠囊對二甲苯所致小鼠急性炎癥模型的影響;(3)采用腹腔染料滲出法觀察經(jīng)血寧膠囊對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響。(4)采用縮宮素造成小鼠痛經(jīng)模型，計(jì)算扭體次數(shù)，評價(jià)經(jīng)血寧膠囊鎮(zhèn)痛作用;(5)采用光電管法觀察經(jīng)血寧膠囊對小鼠鎮(zhèn)靜作用的影響。
　　 4.影響免疫功能實(shí)驗(yàn):(1)采用環(huán)磷酰胺復(fù)制小鼠免疫低下模型，用碳粒廓

5、清法測定單核吞噬細(xì)胞數(shù)量;用比色法測定血清溶血素抗體水平，評價(jià)經(jīng)血寧膠囊對免疫功能的影響。
　　 5.急性毒性試驗(yàn):測定小鼠最大耐受量(Maximaltolerancedose，MTD)，計(jì)算MTD的倍數(shù)，了解經(jīng)血寧膠囊急性毒性范圍。
　　 結(jié)果:
　　 1.經(jīng)血寧膠囊醇提物高、中劑量組和云南白藥均能縮短凝血時(shí)間與空白對照組比較有明顯差異(P＜0.05)，與經(jīng)血寧膠囊水提物比較無顯著性差異。經(jīng)血寧膠囊醇提物高、中

6、、低劑量均能明顯縮短PT，APTT，TT，提高血漿Fbg，與空白對照組比較(P＜0.05或P＜0.01)。經(jīng)血寧膠囊水提物組PT，APTT，TT，F(xiàn)bg與空白對照組比較P＜0.05。經(jīng)血寧膠囊(醇提物)高劑量組APTT，TT與原劑型(水提物)比較有顯著性差異，表明其凝血作用優(yōu)于經(jīng)血寧膠囊原劑型。經(jīng)血寧膠囊醇提物高劑量和云南白藥均可增加PLT數(shù)量，與空白對照組比較(P＜0.01)。醇提物與水提物之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)血寧膠囊醇提物可縮短自加

7、Ca2+至纖維蛋白形成的時(shí)間即PRT，與空白對照組比較(P＜0.01)。經(jīng)血寧膠囊醇提物高劑量組與水提物比較(P＜0.05)。
　　 2.經(jīng)血寧膠囊可減少米非司酮+米索前列醇所致的藥物性流產(chǎn)大鼠子宮出血的總量(7天)，而且有一定的量效關(guān)系，隨著時(shí)間的推移每天子宮出血量逐漸減少，給藥組與空白組比較，7天內(nèi)藥物流產(chǎn)性大鼠子宮每天出血量均呈減少趨勢，原劑型、高、中、低劑量曲線下降幅度依次減小，說明經(jīng)血寧膠囊減少子宮出血量作用明顯。經(jīng)血

8、寧膠囊對大鼠PGF2a水平的影響與模型組比較有顯著性差異(高劑量P＜0.01;中劑量P＜0.05);經(jīng)血寧膠囊高劑量對大鼠AngⅡ水平的影響與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。提示其止血作用機(jī)制可能與影響PGF2a和AngⅡ水平有關(guān)。經(jīng)血寧膠囊高劑量子宮平滑肌張力與原劑型比較有顯著性差異(P＜0.01)，子宮平滑肌收縮曲線圖形剪輯及分析顯示，子宮收縮頻率、振幅和張力均提高，表明經(jīng)血寧膠囊對家兔離體子宮平滑肌具有較好的收縮作用。經(jīng)血

9、寧膠囊對家兔離體主動(dòng)脈血管無明顯作用。
　　 3.經(jīng)血寧膠囊對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹有較明顯的抑制作用，經(jīng)血寧膠囊三個(gè)劑量致炎后300min、360min足跖腫脹度抑制率最大，與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)，與經(jīng)血寧膠囊原劑型比較差異不顯著。經(jīng)血寧膠囊中劑量對二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹有較明顯的抑制作用，耳廓腫脹度與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。經(jīng)血寧膠囊高、中、低劑量抑制率分別為52.42％、37.8

10、4％、29.12％。經(jīng)血寧膠囊對醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加有抑制作用，經(jīng)血寧膠囊高、中、低劑量組的腹腔洗出液OD值分別與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。用藥組的小鼠自主活動(dòng)次數(shù)與空白對照組比較有減少趨勢，抑制率為20.9％，表明有一定的鎮(zhèn)靜作用。經(jīng)血寧膠囊對由縮宮素所致的小鼠痛經(jīng)模型無明顯作用。
　　 4.與模型組比較，左旋咪唑和經(jīng)血寧膠囊高劑量均可顯著提高免疫低下模型小鼠廓清指數(shù)水平(P＜0.05)，與原

11、劑型組比較無顯著性差異。小鼠血清溶血素含量，經(jīng)血寧膠囊中劑量與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)，與原劑型比較也有顯著性差異(P＜0.01)。
　　 5.小鼠灌胃(ig)給予經(jīng)血寧膠囊180g藥材/kg，相當(dāng)于人臨床日用量的250倍(按人用量36g藥材/日/人(60kg)計(jì)算)，未見有明顯的毒性反應(yīng)。
　　 結(jié)論:
　　 1.經(jīng)血寧膠囊具有明顯縮短凝血時(shí)間作用。
　　 2.經(jīng)血寧膠囊對藥物性流產(chǎn)大鼠子

12、宮總出血具有較好的止血作用，并可升高藥物性流產(chǎn)大鼠PGF2a和AngⅡ水平，這可能是其止血作用機(jī)制之一。
　　 3.經(jīng)血寧膠囊對家兔離體子宮平滑肌具有較好的收縮作用，其收縮強(qiáng)度與劑量呈正相關(guān)。經(jīng)血寧膠囊對家兔離體主動(dòng)脈血管無明顯作用。
　　 4.經(jīng)血寧膠囊對化學(xué)物質(zhì)所致的炎癥有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用。
　　 5.經(jīng)血寧膠囊提高免疫低下模型小鼠廓清指數(shù)和血清溶血素水平，提示可影響免疫功能。
　　 6.經(jīng)血寧膠囊