蓽茇有效成分蓽茇寧的調(diào)脂作用及其機(jī)制研究.pdf

1、蓽茇為胡椒科植物蓽茇(Piper longum L.)的近成熟或成熟果穗,是中蒙醫(yī)常用藥材,具有溫中散寒、理氣止痛功能。臨床中不僅用于治療胃脘痛、嘔吐、泄瀉、臍腹痛、牙痛、頭痛,蒙醫(yī)還用于治療高脂血癥、冠心病等病。近些年,國(guó)內(nèi)外對(duì)蓽茇及其有效成分的認(rèn)識(shí)不斷深入,其藥理作用一直是一些學(xué)者的研究熱點(diǎn)。經(jīng)過(guò)數(shù)年的研究,我們課題組從蓽茇中提取得到化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的單一化合物一蓽茇寧,并且首次發(fā)現(xiàn)蓽茇寧具有顯著的降血脂活性。為了深入系統(tǒng)地研究蓽茇寧的

2、調(diào)脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化(AS)作用,并從分子水平探討其作用機(jī)制,本文綜合采用了化學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物和藥理等研究方法,主要進(jìn)行了以下三方面的研究： 第一,采用優(yōu)化的中試合成工藝,以胡椒堿為起始原料制備蓽茇寧,利用高效液相色譜、核磁共振氫譜及核磁共振碳譜的表征,人工合成化合物蓽茇寧。第二,采用高脂血癥(HLP)模型,研究蓽茇寧對(duì)大鼠脂代謝紊亂的影響,并進(jìn)行小鼠急性毒性試驗(yàn)研究,明確蓽茇寧的調(diào)脂作用和安全性；進(jìn)一步系統(tǒng)觀察蓽茇寧對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性

3、HLP和AS形成的影響,檢測(cè)兔血清脂質(zhì)、一氧化氮(NO)、載脂蛋白的含量,以及血清及組織抗氧化酶類(lèi)活性,并取主動(dòng)脈、心臟、肝臟進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察,測(cè)定肝臟脂質(zhì)。第三,采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)蓽茇寧對(duì)HLP大鼠肝臟脂代謝相關(guān)的基因低密度脂蛋白受體(LDLR)、載脂蛋白B(ApoB)和3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A還原酶(HMG-CoAR)mRNA表達(dá)的影響；采用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)技術(shù),檢測(cè)蓽茇寧對(duì)HLP和

4、AS家兔主動(dòng)脈血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)和血管細(xì)胞間黏附分子(VCAM-1)基因表達(dá)的影響。通過(guò)上述研究獲得以下研究結(jié)果： 1.采用半合成的方法成功地制備了大劑量的化合物蓽茇寧,其純度達(dá)到98％以上,不僅充分滿(mǎn)足了藥理、毒理實(shí)驗(yàn)的需要,而且為今后工業(yè)化生產(chǎn)蓽茇寧提供了依據(jù)。 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明蓽茇寧可顯著降低HLP大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),升高高密度

5、脂蛋白膽固醇(HDL-C),并呈劑量依賴(lài)性,能夠有效預(yù)防HLP大鼠血脂升高,同時(shí)降低動(dòng)脈硬化指數(shù)(AI)。 3.小鼠急性毒性試驗(yàn)顯示,一次性經(jīng)口給予蓽茇寧5 g·kg-1,未見(jiàn)毒性反應(yīng)。初步表明蓽茇寧毒性極低,是一種安全、可靠的調(diào)脂化合物,具有進(jìn)一步深入研究的價(jià)值。 4.動(dòng)態(tài)觀察了蓽茇寧對(duì)HLP和AS家兔血清脂質(zhì)含量的影響,結(jié)果顯示蓽茇寧能夠降低兔血清TC、TG、LDL-C、AI,在降低TG方面,優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥辛伐他?。?/p>

6、通過(guò)光鏡、透射電鏡等病理組織學(xué)觀察,蓽茇寧能減少高脂飼料誘導(dǎo)的兔主動(dòng)脈粥樣斑塊的面積和內(nèi)膜增厚,減輕主動(dòng)脈病理?yè)p傷程度和冠狀動(dòng)脈狹窄程度,具有較好的抗AS作用。 5.蓽茇寧可升高HLP大鼠和AS兔血清載脂蛋白Al(ApoAl),降低ApoB含量及ApoB/ApoAl比值,具有調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的作用。 6.蓽茇寧可降低HLP和AS兔肝臟脂質(zhì)含量,減輕HLP引起兔肝臟脂肪變性的病變程度。提示蓽茇寧的降血脂作用,不僅不會(huì)引起脂質(zhì)

7、在肝臟的堆積,而且能降低肝臟TC、TG,初步表明蓽茇寧對(duì)脂肪肝具有防治作用。 7.蓽茇寧能顯著提高AS兔血清NO的水平,具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。 8.蓽茇寧能增強(qiáng)HLP和AS動(dòng)物超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)的活力,降低丙二醛(MDA)的含量,提高機(jī)體的抗氧化能力,減少自由基的損傷,減輕脂質(zhì)過(guò)氧化物對(duì)血管內(nèi)皮的損傷。 9.通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)HLP大鼠肝臟LDL

8、R、ApoB、HMG-CoAR基因表達(dá)水平,表明蓽茇寧可能是通過(guò)提高LDLR基因轉(zhuǎn)錄水平,降低ApoB mRNA表達(dá),從而起到調(diào)節(jié)血脂作用,而與HMG-CoAR mRNA的表達(dá)無(wú)關(guān)。 10.蓽茇寧能夠靶向抑制HLP和AS家兔主動(dòng)脈LOX-1、VCAM-1基因表達(dá),與模型組比較分別減少42％和51％,這可能是其抗AS的一種分子機(jī)制。 綜上所述,本研究首次發(fā)現(xiàn)蓽茇寧具有調(diào)節(jié)脂代謝紊亂及其抗AS作用,且毒性極低,是一種安全、可