咳喘安膠囊抗炎平喘作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　氣道炎癥與支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾?。–OPD）的發(fā)病密切相關(guān)，其他肺疾病如纖維囊性變（CF）及支氣管肺發(fā)育不良（BPD）亦常存在持續(xù)氣道炎癥。慢性氣道炎癥多伴有氣道壁及實質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變，致使影響呼吸功能。氣道結(jié)構(gòu)并非固定不變，炎癥細(xì)胞及基質(zhì)蛋白常呈動態(tài)轉(zhuǎn)換，致使發(fā)病機(jī)理及臨床表現(xiàn)更趨復(fù)雜。目前認(rèn)為最有效的抗炎藥糖皮質(zhì)激素類藥物并不能從根本上逆轉(zhuǎn)哮喘的自然病程，不能糾正潛在的免疫失調(diào)，長期使用還會減弱機(jī)體的保護(hù)性免疫力

2、，導(dǎo)致全身性的副作用。中醫(yī)藥治療哮喘具有療效好，作用靶點多、副作用小、療效確切、善于預(yù)防、長于治本等優(yōu)點，在哮喘的防治中有不可替代的作用，因此，廣泛、深入研究中醫(yī)藥治療哮喘的作用及機(jī)理，不僅有助于闡明中醫(yī)哮病理論的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，還有其重要的臨床意義。
　　方法：
　　實驗一咳喘安膠囊的鎮(zhèn)咳祛痰藥理作用研究
　　50只昆明種小鼠隨機(jī)分成5組?？瞻讓φ战M灌胃給予同體積生理鹽水；陽性對照組灌胃給予苯丙哌林(54mg·kg-1

3、)；3個實驗組分別灌胃給予咳喘安膠囊低、中、高劑量，每日1次，連續(xù)10d。分別于第11d、12d及13d，各組給藥1h后，將小鼠按組交替逐只放入YLS-8A多功能誘咳引喘儀中，濃氨水霧化吸入刺激5s、10s及2min，記錄小鼠咳嗽潛伏期和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)。
　　實驗二咳喘安膠囊對哮喘小鼠的抑制作用及其機(jī)理研究
　　60只BALB/c小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為6組：正常對照組、哮喘模型組組、陽性對照組、咳喘安低劑量組、咳喘安中

4、劑量組、咳喘安高劑量組。于實驗第0、7和14d分別致敏，共三次。從實驗第15天，除正常組外各組小鼠以3％（m/v）OVA進(jìn)行霧化吸入激發(fā)，每天霧化30min，連續(xù)霧化14天，正常對照組以生理鹽水代替OVA霧化激發(fā)。各治療組在霧化激發(fā)后當(dāng)天開始每天給予相應(yīng)藥物,直至霧化結(jié)束，全程給藥14天。陽性對照組給予腹腔注射地塞米松注射液2.0mg/kg體質(zhì)量劑量，咳喘安低、中、高劑量組小鼠灌胃給予咳喘安膠囊混懸液,劑量分別406mg/kg，812m

5、g/kg，1624mg/kg；正常對照組和模型對照組均灌胃給予生理鹽水0.5ml。各組均經(jīng)末次激發(fā)24h后處死。迅速摘取肺臟，右葉肺制成組織勻漿進(jìn)行生化檢測，左葉肺投入10％甲醛中固定，常規(guī)包埋，切片，進(jìn)行HE、免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病變的程度。肺組織勻漿后進(jìn)行丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量檢測。血清用于免疫球蛋白E（IgE）、白介素17（IL-17）的測定。
　　實驗三咳喘安膠囊對慢性支氣管炎小鼠的治療作用及其機(jī)

6、制研究
　　60只昆明小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表分為6組：正常對照組、慢支模型組組、陽性對照組、咳喘安低劑量組、咳喘安中劑量組、咳喘安高劑量組。參照文獻(xiàn)造模方法并加以改進(jìn),建立煙熏聯(lián)合氨水刺激致小鼠慢性支氣管炎模型。咳喘安低、中、高劑量組小鼠灌胃給予咳喘安膠囊混懸液,劑量分別406mg/kg，812mg/kg，1624mg/kg；陽性藥組小鼠灌氨茶堿片水溶液,劑量為69.9mg/kg；正常對照組和模型對照組均灌胃給予生理鹽水0.5ml；各

7、組小鼠灌胃均1次/d,連續(xù)15d。正常組及模型組在煙霧聯(lián)合氨水刺激后，其余治療各組小鼠均于給藥第15d的次日上午摘眼球取血處死。迅速摘取肺臟，右葉肺制成組織勻漿進(jìn)行生化檢測，左葉肺投入10％甲醛中固定，常規(guī)包埋，切片，進(jìn)行HE、免疫組化染色，光學(xué)顯微鏡下觀察病變的程度。肺組織勻漿后進(jìn)行丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、髓過氧化物酶（MPO）含量檢測。
　　結(jié)果：
　　實驗一咳喘安膠囊各劑量組與空白對照組比較均能非常顯著地增

8、加小鼠氣管酚紅排泌量（p<0.01），但3個劑量組之間并未呈現(xiàn)明顯量效關(guān)系。其中劑量組的作用略強(qiáng)于NH4Cl組。對于不同的激發(fā)時間，咳喘安膠囊各劑量均能顯著延長小鼠咳嗽潛伏期（ICP）(p<0.05)，激發(fā)時間為2分鐘時，咳喘安膠囊中、高兩個劑量組與空白對照組相比，有非常顯著性差異(p<0.01)。同時，咳嗽次數(shù)明顯減少，各劑量組與空白對照組相比有顯著性差異(p<0.05)，各劑量組止咳效果同于苯丙哌林組。
　　實驗二模型對照組與

9、正常組相比，MDA含量顯著高于正常對照組，顯示哮喘時，肺內(nèi)氧化還原反應(yīng)失衡。而地塞米松組與模型組相比，兩者沒有顯著性差異。咳喘安膠囊各劑量組與模型對照組相比，均能顯著降低小鼠肺組織中MDA的含量（p<0.01），且顯著低于正常對照組，3個劑量組之間并未呈現(xiàn)明顯量效關(guān)系?？却材z囊中劑量組的作用略強(qiáng)于高劑量和低劑量組。而且模型組與正常組相比，NO含量顯著高于正常組，在給予地塞米松和咳喘安治療后，小鼠肺組織中NO含量顯著降低，各治療組與模型

10、組相比均有顯著性差異。與正常組相比，哮喘模型組小鼠血清中IgE含量顯著高于正常對照組；各治療組與模型組相比，均顯著降低?？却材z囊各劑量組與模型對照組相比，均能顯著降低小鼠肺血清中IgE的含量（p<0.01），且3個劑量組之間呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，其中，中高劑量組IgE水平降至正常。模型對照組與正常組相比，BALF中EOS含量顯著高于正常對照組。咳喘安各治療組與模型組相比，均顯著低于模型組（p<0.01），且各劑量組與正常對照組沒有顯著性

11、差異，3個劑量組之間也不呈現(xiàn)量效關(guān)系。
　　實驗三模型對照組與正常組相比，MDA含量顯著高于正常對照組，氨茶堿組與模型組相比，MDA含量降低，兩者有顯著性差異?？却材z囊各劑量組與模型對照組相比，均能顯著降低小鼠肺組織中MDA的含量（p<0.05），3個劑量組之間并未呈現(xiàn)明顯量效關(guān)系?？却材z囊中劑量組的作用略強(qiáng)于高劑量和低劑量組。模型組與正常組相比，NO含量顯著高于正常組，氨茶堿組顯著低于模型組，與正常組相比沒有顯著性差異。給予

12、咳喘安膠囊治療后，小鼠肺組織中NO含量顯著降低，各治療組與模型組相比均有顯著性差異，各劑量之間相比，沒有顯著性差異。MPO的比較中，模型組與正常組相比，MPO含量顯著高于正常組，氨茶堿組顯著低于模型組。給予咳喘安膠囊治療后，各劑量組與模型組相比，均顯著低于模型組，低劑量組與氨茶堿組相比沒有顯著性差異，咳喘安中高劑量組MPO含量與正常組相比沒有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　咳喘安膠囊能顯著減少氨水所致的小鼠咳嗽發(fā)作的次數(shù)，有一

13、定的鎮(zhèn)咳作用。同時也能增加小鼠氣管酚紅排出量，表明其能增加呼吸道黏液分泌的功能，使痰液濃度下降，使之易于咳出，有一定的祛痰作用?？却材z囊能夠降低哮喘模型及慢性支氣管炎肺組織中的MDA含量和NO的濃度，并能降低慢性支氣管炎肺組織中MPO活力提示咳喘安膠囊有一定的抗氧化能力，能夠較好的控制哮喘和慢性支氣管炎時機(jī)體的炎癥反應(yīng)。同時咳喘安膠囊能夠降低哮喘小鼠血清中IgE及BALF中IL-17的含量，證明了IgE和IL-17在哮喘發(fā)展過程中的作