幾種AD相關(guān)基因的siRNA質(zhì)粒的構(gòu)建及其鑒定.pdf

1、RNA干涉（RNAi）技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室中是一種強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)工具，它是利用具有同源性的雙鏈RNA（dsRNA）誘導(dǎo)特異性的目標(biāo)基因沉默，迅速降低基因表達(dá)水平。siRNA在RNA沉默通道中起中心作用，是對(duì)特定信使RNA（mRNA）進(jìn)行降解的指導(dǎo)要素。
　　 本研究通過Nucleotide BLAST在線設(shè)計(jì)含有小發(fā)夾機(jī)構(gòu)的2條I1PP2A、P53和CREB對(duì)應(yīng)模板DNA序列，經(jīng)過褪火、磷酸化、連接處理后克隆至psuppress質(zhì)粒，構(gòu)建重

2、組質(zhì)粒psuppress-siI1PP2A、psuppress-siP53、psuppress-siCREB。通過酶切和測序鑒定重組產(chǎn)物的正確性。然后使用lipofectAMINE 2000轉(zhuǎn)染試劑將上述構(gòu)建好的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。培養(yǎng)一定時(shí)間之后提取蛋白，利用western blot檢測I1PP2A、P53和CREB蛋白水平的變化。結(jié)果顯示：經(jīng)酶切及測序鑒定，成功構(gòu)建了psuppress-siI1、psuppress-siP