細(xì)胞增殖相關(guān)基因siRNA干涉文庫的構(gòu)建及其功能研究.pdf

1、目前,利用RNA干涉文庫進(jìn)行大規(guī)模、高通量的功能基因掃描已成為發(fā)現(xiàn)新功能基因的重要方式和手段。因此我們希望通過構(gòu)建限制性siRNA干涉文庫掃描在細(xì)胞增殖和分化過程中具有重要作用的新功能基因。通過對原有siRNA表達(dá)載體進(jìn)行改造,我們構(gòu)建了新的雙啟動子siRNA表達(dá)載體；根據(jù)斯坦福大學(xué)2004年公布的在人類胚胎干細(xì)胞與造血干細(xì)胞增殖、分化過程中具有潛在功能的基因芯片分析結(jié)果(http：//smd-www.stanford.edu/cgi-

2、bin/source/sourceResult.html.),我們構(gòu)建了與細(xì)胞增殖和分化相關(guān)基因siRNA干涉文庫。 該文庫目前包括靶向多個(gè)基因的載體,如轉(zhuǎn)錄因子、各類蛋白激酶、細(xì)胞周期調(diào)控蛋白以及一些未知功能基因在內(nèi)的225個(gè)基因。利用這個(gè)限制性RNA干涉文庫,我們對控制細(xì)胞增殖的基因進(jìn)行篩選。通過WST-1高通量掃描,我們發(fā)現(xiàn)了若干同細(xì)胞增殖相關(guān)的基因:CNKSR3(Homo sapiens CNKSR family m