鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因消減文庫的構(gòu)建與分析.pdf

1、本實驗以浙江省優(yōu)質(zhì)蛋鴨品種縉云麻鴨的鴨胚為實驗材料,以DSN酶介導的均一化消減雜交為實驗手段,來構(gòu)建鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因消減文庫,以期找到與鴨胚胎發(fā)育相關(guān)的新基因,探索胚胎發(fā)育基因表達調(diào)控的分子機制。
　　 本實驗共構(gòu)建了兩個鴨早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因的消減雜交文庫。第一個文庫以上一枚蛋產(chǎn)出后的第6小時和第20小時鴨輸卵管中的蛋為實驗材料(其中6小時作為驅(qū)動組,20小時作為實驗組)進行DSN介導的消減雜交,最終得到的消減產(chǎn)物與pU

2、Cm-T載體進行連接,通過藍白斑篩選,隨機挑選其中的216個陽性克隆,最后通過菌液PCR挑選大于750bp的片段進行測序。測序結(jié)果在Vecscreen上去除載體序列,用Staden Package去除冗余序列,最終共得到了54條獨立的差異表達基因,經(jīng)BLAST比對,其中有44條基因具有同源基因,另外10條無同源基因。通過GO注釋發(fā)現(xiàn),這些基因在代謝、建立細胞定位、生物調(diào)節(jié)等各種生物途徑中都發(fā)揮著作用,而一些基因可參與兩種或兩種以上的生物

3、途徑。進一步查閱資料對相關(guān)的同源基因進行研究,其中一些基因在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、免疫調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等方面發(fā)揮著作用,另一些則尚未有相關(guān)功能的研究報道。第二個文庫則分別以上一枚蛋產(chǎn)出后的6小時以及25小時(即鴨胚發(fā)育的第10期)作為實驗材料(其中6小時仍作為驅(qū)動組,25小時作為實驗組),采用同樣的文庫構(gòu)建方法,最終共獲得了66條差異表達基因,比對后發(fā)現(xiàn)其中48條具有同源基因,另外18條無同源基因。在這66條基因中,有27條與第一文庫篩選出來的基