尋常型白癜風(fēng)患者黑素細(xì)胞凋亡及其相關(guān)因子的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文尋常型白癜風(fēng)患者黑素細(xì)胞凋亡及其相關(guān)因子的研究姓名：李秋玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師：朱曉浚曾凡欽20070528中山大學(xué)碩士研究生論文摘要三、實(shí)驗(yàn)對(duì)象和方法l、標(biāo)本來源：實(shí)驗(yàn)組取尋常型穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者白斑區(qū)、白斑邊緣區(qū)、及非自斑區(qū)皮膚，對(duì)照組取健康者正常皮膚，進(jìn)行組織病理檢查及表皮MC的體外培養(yǎng)。2、細(xì)胞培養(yǎng)、觀察：將皮膚標(biāo)本修剪后用消化液消化分離得到表皮，制成表皮單細(xì)胞懸液，接種于黑素細(xì)胞培養(yǎng)

2、基。在倒置顯微鏡下觀察兩組細(xì)胞形態(tài)及塵長(zhǎng)情況，待細(xì)胞長(zhǎng)到約90％滿時(shí)，進(jìn)行消化、傳代。取第“8代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活力、凋亡率及凋亡因子的測(cè)定。3、細(xì)胞活力及凋亡率測(cè)定：用MTT法測(cè)定細(xì)胞活力；用AnnexinV和PropidiumIodide(PI)標(biāo)記后，F(xiàn)CM檢測(cè)MC的凋亡率。4、凋亡相關(guān)因子(Bcl2、Bax、Fas、FasL)測(cè)定：體外培養(yǎng)的白癜風(fēng)組及詎常組MC各基因mRNA水平的表達(dá)用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RTPCR)法進(jìn)行檢測(cè)，蛋白水平

3、表達(dá)用免疫組化、SABC法檢測(cè)。5、UVC誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡：分別用36J／m“、72J／m2，108J／m2劑量的UVC(波長(zhǎng)峰值為254nm)對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組MC進(jìn)行照射，24h后用流式細(xì)胞儀雙標(biāo)法測(cè)定細(xì)胞凋亡率。6、UVC誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡相關(guān)因子表達(dá)的檢測(cè)：用RTPCR法檢測(cè)體外培養(yǎng)的白癜風(fēng)組及正常組MC經(jīng)UVC照射后各基因的轉(zhuǎn)錄水平。7、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。顯著性水準(zhǔn)設(shè)為005。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果