性別交叉骨髓、肝移植探討肝癌起源的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文旨在通過性別交叉骨髓移植、肝移植大鼠誘癌模型證明骨髓干細(xì)胞參與了肝癌的發(fā)生，并在此理論基礎(chǔ)上探討肝前體細(xì)胞(胚肝細(xì)胞)對(duì)大鼠肝癌的影響。 第一部分：通過骨髓移植建立雌雄嵌合體大鼠模型并DEN誘發(fā)肝癌。 通過性別交叉骨髓移植建立穩(wěn)定的雌雄嵌合體大鼠模型(雌性大鼠移植了雄性骨髓干細(xì)胞)，并利用PCR檢測(cè)Sry基因(性別決定基因，Y染色體標(biāo)記)鑒定模型是否構(gòu)建成功；然后將雌雄嵌合體大鼠飼喂DEN(二乙基亞硝胺)誘發(fā)肝癌。

2、 結(jié)果：通過性別交叉骨髓移植，成功建立了雌雄嵌合體大鼠模型，并通過PCR進(jìn)行了證實(shí)，使追蹤骨髓干細(xì)胞成為可能；同時(shí)，經(jīng)過盡心的飼養(yǎng)與護(hù)理，獲得10例珍貴的雌雄嵌合體大鼠肝癌標(biāo)本，為下一步的實(shí)驗(yàn)打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。 第二部分：通過肝移植建立雌雄嵌合體大鼠模型并DEN誘發(fā)肝癌。 通過性別交叉肝移植建立穩(wěn)定的雌雄嵌合體大鼠模型(雄性大鼠移植了雌性肝臟)，然后將雌雄嵌合體大鼠飼喂DEN(二乙基亞硝胺)誘發(fā)肝癌。 結(jié)果：

3、通過性別交叉肝移植，成功建立了雌雄嵌合體大鼠模型，經(jīng)過精心的飼養(yǎng)與護(hù)理，獲得4例珍貴的雌雄嵌合體大鼠肝癌標(biāo)本，為下一步的實(shí)驗(yàn)打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。 第三部分：探討骨髓干細(xì)胞是否參與大鼠肝癌的發(fā)生。 探尋骨髓干細(xì)胞是否參與肝癌的發(fā)生。14只雌雄嵌合體大鼠肝癌標(biāo)本(10只骨髓移植后，4只肝移植后)，首先通過H-E染色及免疫組織化學(xué)明確診斷為肝細(xì)胞癌；然后在分子水平證實(shí)肝癌組織含有雄性細(xì)胞——PeR檢測(cè)肝癌組織Sty基因(Y染色體特

4、異性標(biāo)志)陽性，同時(shí)在形態(tài)學(xué)上證實(shí)肝癌組織含有雄性細(xì)胞——熒光原位雜交(FISH)檢測(cè)肝癌組織中存在Y染色體陽性細(xì)胞。通過對(duì)連續(xù)切片的病理結(jié)構(gòu)及FISH結(jié)果比較分析，確定雌雄嵌合體肝癌組織存在Y染色體陽性肝癌細(xì)胞。以上這些結(jié)果表明：骨髓干細(xì)胞參與了肝癌的發(fā)生。 第四部分：探討胚肝細(xì)胞對(duì)大鼠原發(fā)性肝癌影響。 探討肝前體細(xì)胞(胚胎肝細(xì)胞)對(duì)于大鼠肝癌的影響。從目前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，骨髓干細(xì)胞參與了大鼠肝癌的發(fā)生；同時(shí)，骨髓干細(xì)

5、胞是一種多能干細(xì)胞，分化成血液細(xì)胞、肝臟細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等。研究推測(cè)：骨髓干細(xì)胞遷移至肝臟后，首先分化為肝前體細(xì)胞，然后再分化為肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞，參與慢性肝損傷修復(fù)和肝癌發(fā)生。14天胚胎大鼠的肝臟內(nèi)含有大量肝前體細(xì)胞(胚肝細(xì)胞)，這些肝前體細(xì)胞對(duì)肝癌有什么影響呢?5只SD誘癌90天大鼠經(jīng)尾靜脈多次補(bǔ)充胚肝細(xì)胞，觀察大鼠的生存期及腫瘤生長(zhǎng)情況；對(duì)照組為同批次5只誘癌大鼠。 結(jié)果：與對(duì)照組相比，處理組大鼠身體狀況差，生存