大鼠移植性肝癌肝移植模型的建立及紫杉醇抑制大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)的機制.pdf

1、肝癌根治性治療主要包括肝切除和肝移植，因為肝癌病人多伴有嚴(yán)重的肝硬變或多發(fā)腫瘤，所以大多數(shù)的肝癌病人不是肝切除的手術(shù)適應(yīng)癥。同時，即使切除了腫瘤，術(shù)后大多數(shù)病人仍死于術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。肝移植是唯一能同時處理肝硬變及肝腫瘤兩種病變的治療手段，可用來治療不能切除的肝癌，由于徹底切除了腫瘤發(fā)生的“土壤”，其術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率也明顯低于肝切除，然而術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移仍然是治療肝癌肝移植長期療效的最重要的因素為評價肝移植術(shù)后腫瘤轉(zhuǎn)移模式，因此有必要

2、建立類似肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的動物模型。 材料和方法 1．實驗動物： 供體：清潔級雄性SD大鼠，50只，體重220—250g；受體：肝癌模型鼠為SD雄性成年大鼠50只，體重220—250g供體體重略小于或等于受體． 2．紫杉醇注射液(paclitaxel)：為北京四環(huán)醫(yī)藥科技股份有限公司產(chǎn)品，規(guī)格30mg／5m1，純度98％(HPLC)，分子量為853192，臨用前用1640稀釋至所需濃度。

3、 3．實驗分組：共分為兩組： A組(n=25)肝移植術(shù)后無干預(yù)組：肝癌模型鼠walker256瘤組織塊接種后M天，接受肝移植手術(shù)，術(shù)后第一天起腹腔內(nèi)注射生理鹽水O．5ml／d-1。B組(n=25)肝移植術(shù)后紫杉醇干預(yù)組：25只肝癌模型鼠walker256瘤組織塊接種后14天，接受肝移植手術(shù)，術(shù)后第一天起腹腔內(nèi)注射紫杉醇(Paclitaxe]，0．5mg．kg-1．d-1)。兩組療程均為14天。 4．病理和生存觀察：A，B

4、組肝移植術(shù)后21天開始，每周每組處死5只大鼠，處死大鼠后，10％formalin由氣道注入后切取肺臟，10％formalin中保存，光鏡下肺轉(zhuǎn)移灶計數(shù)，圖象分析技術(shù)測量肺組織面積。結(jié)果=肺轉(zhuǎn)移灶計數(shù)／單位肺組織面積，同時切除肝癌，液氮凍存，肝組織在10％formalin中固定，常規(guī)H．E染色。計算生存率，瘤塊接種成瘤率及其肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率。 1．A組肝移植3周存活率80％(20／25)，B組：肝移植3周存活率84％(2l／25，由于

5、大鼠肝移植后3周開始處死大鼠并檢測標(biāo)本，所以未進(jìn)一步計算生存率。2．本研究中，兩組的瘤塊接種成瘤率均為100％。A組：第3，4，5，6周的肺轉(zhuǎn)移率為0(0／5)，20％(1／5)，60％(3／5)，60％(3／5)；B組：第3，4，5，6周的肺轉(zhuǎn)移率為0(O／5)，0(0／5)，40％(2／5)，33％(2／6)。A組共有7只大鼠發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，B組4只大鼠發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，A組大鼠的肺轉(zhuǎn)移灶計數(shù)，顯著高于B組(Mann2Whitney∥非參數(shù)檢

6、驗，／／=40，P=0．039)。 結(jié)果和討論 在這一研究中我們成功的建立了大鼠移植性肝癌肝移植的模型，并且發(fā)現(xiàn)肝移植可延長肝癌大鼠的生存時間，肺臟是大鼠肝癌肝移植術(shù)后腫瘤轉(zhuǎn)移的主要部位，同時我們發(fā)現(xiàn)紫杉醇可以顯著降低肝癌肝移植大鼠的術(shù)后肺轉(zhuǎn)移瘤的發(fā)生率，減少轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)量，縮小轉(zhuǎn)移瘤的侵及范圍。我們可以在此模型的基礎(chǔ)上探討肝移植術(shù)后腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的機制，特點，可能有益的預(yù)測指標(biāo)，及干預(yù)措施。并作為臨床及基礎(chǔ)的進(jìn)一步深入研究

7、的實驗平臺。 第二部分：紫杉醇抑制大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)的機制 目的探討紫杉醇抑制大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)的機制。方法建立大鼠原位肝移植模型(Lewis大鼠一BN大鼠)，將大鼠分為三組：生理鹽水對照組，紫杉醇低劑量干預(yù)組，高劑量干預(yù)組，觀察受體生存時間，檢測肝臟功能，病理組織學(xué)改變，外周血單核細(xì)胞(PBMCs)中對供體特異的CD4+Th前體細(xì)胞(Th一p)的比率，脾臟T淋巴細(xì)胞凋亡的比率，和外周血細(xì)胞因子IFN—γ

8、／IL一4(代表Thl／Th2)水平。結(jié)果紫杉醇明顯延長大鼠術(shù)后生存時間(對照組：10．6±1．9dvs．低劑量組：16．1±3．4d，logrank=-9．06，P

9、，尸值均