大鼠原位肝移植術(shù)后急性肺損傷模型的建立以及綠茶多酚對肝移植術(shù)后急性肺損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：建立原位肝移植手術(shù)急性肺損傷的動物模型，并初步探討肝移植所致成年大鼠急性肺損傷炎癥反應(yīng)的相關(guān)機制；觀察綠茶多酚對大鼠原位肝移植術(shù)后急性肺損傷的影響。 方法：(1)建立成年大鼠原位肝移植術(shù)后急性肺損傷模型：健康雄性SD大鼠72只，隨機分為兩組：對照組(8只)和肝移植組(32對64只)。對照組進行麻醉和開腹手術(shù)，肝移植組進行肝移植手術(shù)，分別于手術(shù)完成后1h、4h、8h和12h處死大鼠。觀察各組大鼠動脈血氣變化，計算氧合指數(shù)(P

2、aO2/FiO2)，測定肺系數(shù)、肺濕/干值、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞(WBC)、中性粒細胞計數(shù)和總蛋白含量，HE染色觀察肺組織病理學改變，BALF和血清中TNF-α，IL-1β、IL-8含量，肺組織和血清中MDA、SOD水平以及肺組織MPO水平。免疫組化法檢測NF-κB蛋白的表達情況，以及WesternBlotting法檢測各組肺組織TNF-α和IL-1β的表達情況。(2)應(yīng)用第一部分建立的肺損傷模型，選取健康雄性SD大鼠4

3、0只，隨機分為三組：對照組(8只)、肝移植組(8對)和綠茶多酚組(8對)，對照組進行麻醉和開腹手術(shù)，肝移植組進行肝移植手術(shù)，綠茶多酚組在肝移植術(shù)前1h通過尾靜脈給予綠茶多酚100mg/kg。于手術(shù)完成后4h處死大鼠。觀察各組大鼠動脈血氣變化，計算氧合指數(shù)(PaO2/FiO2)，測定肺系數(shù)、肺濕/干值、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞(WBC)、中性粒細胞計數(shù)和總蛋白含量，HE染色觀察肺組織病理學改變，BALF和血清中TNF-α，IL

4、-1β、IL-8含量，肺組織和血清中MDA、SOD水平以及肺組織MPO水平。免疫組化和Western Blotting法檢測各組肺組織NF-kB和ICAM-1的表達情況。 結(jié)果：(1)原位肝移植術(shù)后，隨著時間的延長，大鼠氧合指數(shù)逐漸下降，4h達到最低值。肺系數(shù)、肺W/D值逐漸增加，4h達到高峰。BALF中白細胞、中性粒細胞計數(shù)及蛋白含量逐漸增加。BALF和血清中TNF-α、IL-1β水平在手術(shù)后1h即升高，隨后逐漸下降。BALF

5、中IL-8水平則在4h達到高峰。肺組織和血清中MDA、MPO含量增加，4h達到峰值。肺組織和血清中SOD活性逐漸下降，4h達到最低值。肺組織中TNF-α和IL-1β蛋白表達逐漸增多，并且在4h顯著表達，表達峰值晚于血清TNF-α、IL-1β水平。(2)綠茶多酚干預組同肝移植組相比氧合指數(shù)增加，肺系數(shù)、肺W/D值下降，BALF中白細胞、中性粒細胞計數(shù)及蛋白含量下降，BALF和血清中TNF-α，IL-1β、IL-8水平下降，肺組織和血清中M

6、DA、MPO含量下降，SOD活性增加。ICAM-1和NF-κB表達減少。 結(jié)論：(1)原位肝移植手術(shù)后急性肺損傷動物模型的建立是成功的，；(2)原位肝移植導致急性肺損傷的機制是肝移植后產(chǎn)生的炎癥因子進入肺部導致肺損傷，并且通過趨化中性粒細胞進入肺部和促進NF-κB進入細胞核促進炎癥因子TNF-α、IL-1β及IL-8等的轉(zhuǎn)錄擴大炎癥反應(yīng)，此外氧化/抗氧化失衡亦參加了急性肺損傷的發(fā)展；(3)綠茶多酚可減少炎癥因子的生成，抑制中性粒