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文檔簡介
1、目的:腎間質纖維化(TIF)是各種原因所致腎臟疾病進展至終末期腎功能衰竭的共同病理特征。大量臨床病理資料表明,各種原因引起的慢性腎功能損傷與腎小管間質纖維化病變的嚴重程度較與腎小球病變的關系更為密切。而細胞外基質(ECM)的合成和降解失衡,造成其大量積聚是引起腎間質纖維化的主要原因[2]。臨床上應用血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)等藥物,通過調節(jié)ECM合成、降解來防治TIF,但循證醫(yī)學已證明,上述藥物
2、在血肌酐高于一定值時,對腎臟不但無保護作用,還能加重其損害,且藥價偏高,因而使其應用受限。因此尋找具有多途徑多靶點治療作用、安全低成本的藥物對腎間質纖維化的防治有重要的意義。本實驗應用導師經(jīng)驗方龍甲參芪湯對單側輸尿管結扎(UUO)誘導的腎間質纖維化大鼠模型進行干預性治療,并以ARB類藥物纈沙坦(Valsartna)為對照,旨在通過觀察龍甲參芪湯對實驗動物梗阻側腎臟組織形態(tài)學及轉化生長因子β1(TGF-β1)、Ⅲ型膠原(ColⅢ)及其受體
3、的影響,探討中藥復方-龍甲參芪湯對腎間質纖維化的拮抗作用及可能的作用機制。 方法:本實驗研究選用雄性SD大鼠40只,適應性飼養(yǎng)一周后,分別置代謝籠里取尿,測定尿蛋白及尿紅細胞全部陰性,隨機分為4組,假手術組(SHAM group)、模型組(UUO group)、纈沙坦組(UUOV group)、龍甲參芪湯(UUOLgroup)組,每組10只,除假手術組外,各組動物均結扎左側輸尿管并在術前一天灌胃給藥,假手術組與模型組分別灌入等量
4、的生理鹽水,于結扎后第15天用全自動生化分析儀測各組大鼠的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),殺檢測腎/體比(Index),并取左側腎臟行病理切片,光鏡下觀察各組大鼠腎間質及腎小管的變化情況,免疫組化法檢測TGF-β1、ColⅢ在腎間質及腎小管的表達情況,并用病理圖像分析軟件進行半定量分析。 結果: 1.Index、SCr、BUN檢測結果:實驗結束時,左側腎臟體積增大,大鼠Index模型組比假手術組明顯升高,纈沙坦組及龍
5、甲參芪湯組與模型組比較顯著降低,其中纈沙坦組較龍甲參芪湯組略低,但兩組間無統(tǒng)計學意義。SCr測定結果顯示,模型組明顯高于假手術組,纈沙坦組、龍甲參芪湯組大鼠的SCr與模型組比較顯著降低,其中纈沙坦組的SCr低于龍甲參芪湯組,但無統(tǒng)計學意義。BUN測定結果顯示,模型組大鼠BUN明顯高于假手術組,纈沙坦組、龍甲參芪湯組與模型組相比顯著降低,其中纈沙坦組BUN低于龍甲參芪湯組,但無統(tǒng)計學意義。 2.腎組織HE及天狼猩紅染色顯示:模型組
6、間質大量炎性細胞浸潤和纖維組織增生,腎小管部分萎縮、管腔閉塞或擴張,腎小球數(shù)目明顯減少,面積縮小,腎小囊黏連或擴張,小囊周圍大量纖維組織增生。各治療組間質可見多少不等的炎性細胞浸潤,少量纖維組織增生,腎小管輕度擴張,部分腎小球輕度萎縮,小囊擴張,腎小球數(shù)量無明顯改變。 3.TGF-β1在腎組織的表達、分布及半定量分析結果:TGF-β1主要在梗阻腎近曲小管上皮細胞胞漿及間質細胞內呈強陽性表達,假手術組實驗動物在腎小管上皮細胞內TG
7、F-β1蛋白為弱陽性,其余各組在腎小管上皮細胞、間質細胞及腎小球內表達顯著增強,其中模型組較假手術組TGF-β1的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高,纈沙坦組、龍甲參芪湯組與模型組相比,TGF-β1的陽性面積及積分光密度均呈顯著性下降,提示龍甲參芪湯、纈沙坦均可抑制梗阻側腎組織TGF-β1的表達,纈沙坦組優(yōu)于龍甲參芪湯組,但無顯著性差異。 4.ColⅢ在腎組織的表達、分布及半定量分析結果:ColⅢ主要表達于梗阻腎的間質細胞內。
8、假手術組大鼠腎間質ColⅢ呈弱陽性表達,其余各組表達顯著增強,為條索狀或成片塊狀。其中,模型組與假手術組相比ColⅢ的陽性面積及積分光密度值呈顯著性升高,纈沙坦組、龍甲參芪湯組與模型組相比,ColⅢ的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性下降,提示龍甲參芪湯、纈沙坦均可抑制梗阻側腎組織中ColⅢ的組織表達,其中,纈沙坦組優(yōu)于龍甲參芪湯組,但無顯著性差異。 5.腎間質纖維化面積半定量分析結果模型組腎間質纖維化程度較假手術組明顯加重;纈沙
9、坦組、龍甲參芪湯組與模型組比較,腎間質纖維化面積明顯減少,提示龍甲參芪湯及纈沙坦均有拮抗腎間質纖維化的作用。其中,纈沙坦組優(yōu)于龍甲參芪湯組,但無顯著性差異。 結論: 1.龍甲參芪湯能降低血清肌酐、尿素氮,降低腎臟指數(shù),保護腎功能。 2.龍甲參芪湯能抑制TGF-β1、ColⅢ在腎組織的表達,從而減少病變腎組織ECM成分的合成及積聚,延緩腎間質纖維化的進程。 3.龍甲參芪湯對UUO大鼠腎間質纖維化的拮抗作用與
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