CD45分子在重癥肌無(wú)力患者胸腺的表達(dá)及其對(duì)T細(xì)胞分化的影響.pdf

1、背景與目的:
　　重癥肌無(wú)力(myasthenia gravis,MG)是由乙酰膽堿受體(acetylcholinereceptor,AChR)抗體介導(dǎo)的、神經(jīng)肌肉傳遞障礙為表現(xiàn)的一種器官特異性自身免疫病。MG的發(fā)病與遺傳因素、機(jī)體免疫功能異常及免疫調(diào)節(jié)功能紊亂等多種因素有關(guān),對(duì)重癥肌無(wú)力的相關(guān)研究顯示,該病的發(fā)生和胸腺的關(guān)系十分密切,80％-90％的MG患者胸腺有胸腺增生或胸腺瘤等異常病變。胸腺作為中樞免疫器官是T淋巴細(xì)胞發(fā)育、

2、分化、成熟的場(chǎng)所,T細(xì)胞在胸腺經(jīng)歷一系列膜分子的表達(dá)及陽(yáng)性選擇和陰性選擇過(guò)程,獲得功能性TCR的表達(dá)、MHC限制性和自身耐受性,發(fā)育成熟進(jìn)入外周血液循環(huán),并定居于脾臟、淋巴結(jié)等外周免疫器官。胸腺結(jié)構(gòu)和功能異常,將影響T細(xì)胞在胸腺的分化發(fā)育和成熟。由于陰性選擇是清除自身反應(yīng)性T細(xì)胞、形成自身免疫耐受的關(guān)鍵環(huán)節(jié),因此,陰性選擇障礙是導(dǎo)致自身免疫性疾病發(fā)生的原因之一。
　　近年來(lái)有關(guān)研究發(fā)現(xiàn),MG的發(fā)病過(guò)程常常與T細(xì)胞異常有關(guān),T細(xì)胞介

3、導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能紊亂是MG發(fā)病的一個(gè)重要原因。CD45是一種單鏈跨膜糖蛋白,包括CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO等多種異構(gòu)體,因其胞質(zhì)區(qū)具有酪氨酸磷酸酶(protein-tyrosine phosphatase,PTP)活性,在調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和TCR、BCR介導(dǎo)的細(xì)胞活化中有重要作用。多種細(xì)胞(如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)均可表達(dá)CD45分子,其中T細(xì)胞表面的CD45分子的表達(dá)對(duì)其發(fā)育、分化及功能的發(fā)揮影響較大,C

4、D45RA和CD45RO與T細(xì)胞的功能狀態(tài)及T細(xì)胞在胸腺的分化過(guò)程密切相關(guān)。
　　本研究采用免疫組化法檢測(cè)CD45RA、CD45RO分子在MG增生型胸腺組織中的表達(dá),并用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MG患者胸腺細(xì)胞表面CD45RA、CD45RO、以及CD4和CD8分子的表達(dá)水平,通過(guò)RT-PCR和Real time PCR技術(shù)從基因水平上檢測(cè)了CD45、CD69、Bcl-2及CD28分子的表達(dá),旨在探索MG增生型胸腺組織中T細(xì)胞亞群的發(fā)育和CD

5、45分子在疾病中的作用,為深入研究MG的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用免疫組化法檢測(cè)15例MG患者增生型胸腺和10例正常對(duì)照者胸腺組織CD45RA、CD45RO分子的分布及表達(dá)。
　　2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法分析15例MG患者增生型胸腺和10例正常對(duì)照者胸腺細(xì)胞CD4、CD8、CD45RA、CD45RO的表達(dá)。
　　3.采用RT-PCR法、Real time PCR法定量分析7例MG患者和7例正常對(duì)

6、照胸腺組織中CD45、CD69、Bcl-2及CD28分子mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化顯示,MG組和正常對(duì)照組胸腺組織中CD45RA均呈弱陽(yáng)性表達(dá),二者無(wú)明顯差異(p>0.05),而CD45RO在MG組呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)且為灶狀分布,與對(duì)照組相比有明顯差異(p<0.05)。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,MG患者胸腺組織中CD45RA分子表達(dá)顯著低于對(duì)照組(p<0.01),而CD45RO分子表達(dá)顯著高于對(duì)照

7、組(p<0.01)。MG患者胸腺雙陰性細(xì)胞(CD4-CD8-)與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05),雙陽(yáng)性細(xì)胞(CD4+CD8+)顯著性高于正常對(duì)照組(p<0.05),而單陽(yáng)性細(xì)胞(CD4+CD8-和CD4-CD8+)在MG組均顯著性低于對(duì)照組(p<0.05)。
　　3.MG組和正常對(duì)照組胸腺組織均有CD45、CD69、bcl-2及CD28 mRNA的表達(dá),通過(guò)熒光定量PCR進(jìn)一步定量分析發(fā)現(xiàn),MG患者胸腺組織中CD45、CD

8、69、bcl-2和CD28 mRNA的表達(dá)與對(duì)照組相比分別上調(diào)了2.55、2.03、2.21和2.08倍(2-△△Ct>2)。
　　結(jié)論:
　　1.MG增生型胸腺組織中CD45RO亞型表達(dá)顯著異常,可能是胸腺增生型MG發(fā)病機(jī)制的一個(gè)重要因素,與MG患者胸腺組織T細(xì)胞分化發(fā)育異常有關(guān);
　　2.MG胸腺細(xì)胞存在異?；罨?CD45 mRNA的高表達(dá)可能對(duì)TCR信號(hào)途徑下游通路進(jìn)行了調(diào)控,介導(dǎo)了CD69的表達(dá),對(duì)于細(xì)胞功能的