安絡(luò)小皮傘液體發(fā)酵條件的優(yōu)化及其活性的研究.pdf

1、安絡(luò)小皮傘菌是我國傳統(tǒng)的藥用真菌，不僅在藥用方面有很好的功效，在食用和保健方面有很高的價(jià)值，因此，對(duì)小皮傘菌液體深層發(fā)酵及其藥理活性的研究具有重要的意義和價(jià)值。
　　本實(shí)驗(yàn)通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)小皮傘菌發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化，在此基礎(chǔ)上對(duì)小皮傘菌進(jìn)行胞內(nèi)外多糖抗氧化活性的測定，并運(yùn)用小鼠實(shí)驗(yàn)分析了小皮傘菌發(fā)酵提取物鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的藥理作用。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.以提高安絡(luò)小皮傘菌生物量為目的，對(duì)小皮傘菌培養(yǎng)基及其發(fā)酵條

2、件進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化。對(duì)C源和N源種類進(jìn)行篩選，在此基礎(chǔ)上對(duì)其濃度進(jìn)行優(yōu)化，通過正交試驗(yàn)對(duì)小皮傘菌培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化，最終確立了最優(yōu)培養(yǎng)基為玉米粉:3％、麩皮:3％、MgSO4:0.1％、KH2PO4:0.3％、VB1:10 mg、水:1000mL;通過對(duì)小皮傘菌液體發(fā)酵時(shí)間、溫度、轉(zhuǎn)速及其培養(yǎng)基的初始pH、接種量、裝液量進(jìn)行篩選，確立了最適發(fā)酵條件為:發(fā)酵時(shí)間:6d、溫度:25℃、轉(zhuǎn)速:150 r/min、初始pH:5、接種量:9％、裝液

3、量:90 mL。
　　2.通過發(fā)酵獲得安絡(luò)小皮傘菌絲體及發(fā)酵液，采取醇沉法提取發(fā)酵濾液胞外多糖，采用水提醇沉法提取菌絲體胞內(nèi)多糖，以抗壞血酸為對(duì)照，通過體外實(shí)驗(yàn)研究安絡(luò)小皮傘胞外多糖、胞內(nèi)多糖對(duì)羥基自由基、超氧陰離子、DPPH自由基的清除作用，評(píng)定其抗氧化性能。結(jié)果表明安絡(luò)小皮傘胞外多糖、胞內(nèi)多糖對(duì)羥基自由基、DPPH·均具有顯著的清除作用，且清除羥基自由基能力胞內(nèi)多糖＞胞外多糖，清除DPPH·能力胞外多糖＞胞內(nèi)多糖，對(duì)·O2-有

4、清除作用但不明顯。三種不同的體外自由基清除體系證明了小皮傘菌多糖具有較強(qiáng)的抗氧化活性。
　　3.通過熱板實(shí)驗(yàn)，測定給藥后lh小鼠的痛閾，結(jié)果表明給藥后小鼠熱板痛閾值較給藥前和生理鹽水組相比延長，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中對(duì)照組和中濃度組效果更好，說明安絡(luò)小皮傘菌具有鎮(zhèn)痛作用。通過小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)，對(duì)小鼠硝酸甘油造模后，小鼠靜止時(shí)間縮短，與生理鹽水組比較有差異，給藥后小鼠靜止時(shí)間延長，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中安定組和安絡(luò)小皮傘菌中濃度組