真姬菇液體發(fā)酵工藝優(yōu)化及其多糖活性的研究.pdf

1、本文以菌絲球個(gè)數(shù)和菌絲體產(chǎn)量?jī)蓚€(gè)指標(biāo)為目標(biāo)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，研究了液體發(fā)酵真姬菇種子制備條件；同時(shí)以菌絲體產(chǎn)量、多糖產(chǎn)量和多糖活性為篩選依據(jù)，對(duì)真姬菇的液體發(fā)酵條件進(jìn)行了全面的優(yōu)化；以粗多糖、純多糖和多糖活性為選擇依據(jù)，研究多糖高效制備條件；并利用稻瘟霉法對(duì)發(fā)酵獲得多糖的抗腫瘤活性進(jìn)行了檢測(cè)，建立了通過發(fā)酵工程制備真姬菇多糖的工藝技術(shù)，以期能為真姬菇多糖的制備與利用提供科學(xué)依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容包括：
　?、磐ㄟ^對(duì)真姬菇種子液體培養(yǎng)基配方

2、、靜置預(yù)培養(yǎng)天數(shù)、不同培養(yǎng)天數(shù)的研究，獲得了最佳種子制備條件：均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化后的培養(yǎng)基配方，獲得的菌絲球個(gè)數(shù)比出發(fā)培養(yǎng)基40＃液體培養(yǎng)基提高了7.2倍，菌絲體產(chǎn)量提高了2.5倍；通過靜置預(yù)培養(yǎng)時(shí)間研究發(fā)現(xiàn)，靜置預(yù)培養(yǎng)1天后再進(jìn)行搖床培養(yǎng)，菌絲體產(chǎn)量和菌絲球個(gè)數(shù)分別是接種后直接進(jìn)行搖床培養(yǎng)的1.5倍和1.6倍；通過對(duì)種子培養(yǎng)時(shí)間的研究發(fā)現(xiàn)，液體種子的最佳培養(yǎng)時(shí)間是9天，此時(shí)種子處于最高生長(zhǎng)階段。
　?、普婕Ч桨l(fā)酵條件優(yōu)化的結(jié)果表明：

3、適合液體發(fā)酵的條件為溫度25℃，培養(yǎng)基初始pH值4.5，裝液量80-100mL(250mL三角瓶)，接種量15％；培養(yǎng)基方面，適合的碳源為葡萄糖，氮源為有機(jī)氮源，其中酵母粉、牛肉膏和大豆蛋白胨都是適合的氮源，碳氮比3：1至6：1時(shí)比較適宜，無機(jī)鹽中磷酸二氫鉀和碳酸鈣更適合液體發(fā)酵產(chǎn)生多糖，農(nóng)副產(chǎn)品的添加對(duì)于菌絲體生長(zhǎng)和多糖產(chǎn)生均具有促進(jìn)作用，其中以添加地瓜面的培養(yǎng)基多糖產(chǎn)量和活性最好。
　?、峭ㄟ^均勻設(shè)計(jì)對(duì)培養(yǎng)基優(yōu)化，菌絲體產(chǎn)量是

4、優(yōu)化前40#培養(yǎng)基的1.8倍，胞外多糖產(chǎn)量是優(yōu)化前的3.5倍，胞內(nèi)多糖是優(yōu)化前的3.2倍。通過均勻設(shè)計(jì)法對(duì)發(fā)酵條件整體10個(gè)因素進(jìn)行了優(yōu)化：獲得目前報(bào)道的真姬菇胞外多糖最高產(chǎn)量10.05 g/L；獲得多糖產(chǎn)量和活性最佳的發(fā)酵條件為大豆蛋白胨25 g/L，葡萄糖23.46 g/L，地瓜面10 g/L，玉米面6.88 g/L，小麥面10 g/L，豆面10 g/L，碳酸鈣0.88 g/L，磷酸二氫鉀1.72 g/L，pH值5.38，接種量15

5、0mL/L，此條件下菌絲體產(chǎn)量是優(yōu)化前40#培養(yǎng)基的3.2倍，胞外多糖產(chǎn)量是優(yōu)化前的5.3倍，胞內(nèi)多糖產(chǎn)量是優(yōu)化前的約4.0倍。
　　⑷通過利用均勻設(shè)計(jì)法對(duì)影響多糖沉淀效果的三個(gè)因素：乙醇濃度、沉淀溫度和離心速度進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果表明：沉淀溫度、乙醇濃度和離心速度對(duì)于多糖產(chǎn)量都有影響，其中乙醇濃度的影響最大，85%是適合的乙醇終濃度；對(duì)于沉淀溫度，可在常溫下進(jìn)行；對(duì)于離心速度，6000-7000 rpm比較適合。利用稻瘟霉法對(duì)獲得多糖