若干種光敏藥物對(duì)人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901體外光動(dòng)力殺傷效應(yīng)研究.pdf

1、目的：研究光敏劑CPD1、CPD2和MB在人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901的分布及亞細(xì)胞定位，并探討其介導(dǎo)的光動(dòng)力對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。 方法：人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901分別給予CPD1、CPD2和MB，避光孵育一段時(shí)間后，加入線粒體特異性的熒光探針Rhodamin123和膜特異性的熒光探針DiI，分別對(duì)細(xì)胞的線粒體和膜結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。氬離子激光器（488nm）激發(fā)CPD1、CPD2和Rh123，MB和DiI使用氦氖激光器激發(fā)，激發(fā)

2、波長(zhǎng)分別為632．8nm和543nm。在激光共聚焦顯微鏡下，通過(guò)偽彩色融合的方法和相關(guān)系數(shù)法分別定性和定量的分析CPD1、CPD2和MB在SGC-7901細(xì)胞的亞細(xì)胞定位。 SGC-7901細(xì)胞隨機(jī)分為單純細(xì)胞組、單純給予光敏劑組、單純給予激光組和光動(dòng)力學(xué)治療組。單純給予光敏劑組和光動(dòng)力學(xué)治療組的細(xì)胞分別給予CPD1、CPD2和MB：CPD1和CPD2濃度為0．125、0．25、0．5、1．0、1．5、2．0和2．5μg/mL

3、；MB的濃度為0．5、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．0、8．0和10．0μg/mL。單純給予激光組和光動(dòng)力學(xué)治療組的細(xì)胞給予670nm的激光照射，光劑量為10J/c㎡。采用伊紅染料排斥法計(jì)算各組細(xì)胞死亡率。同時(shí)觀察細(xì)胞給予相同濃度的MB孵育不同時(shí)間后，MB對(duì)細(xì)胞的光動(dòng)力殺傷效應(yīng)隨時(shí)間的變化情況。 結(jié)果：CPD1、CPD2和MB均分布于SGC-7901細(xì)胞的細(xì)胞膜、胞漿內(nèi)和核膜周圍，但均未進(jìn)入細(xì)胞核。CPD1、CPD

4、2和MB的熒光與R123的熒光融合呈現(xiàn)黃色，與DiI的熒光融合呈現(xiàn)橙紅色熒光；CPD1的熒光與Rh123和DiI的熒光的相關(guān)系數(shù)分別為0．39914和0．66731，CPD2的熒光與Rh123和DiI的熒光的相關(guān)系數(shù)分別為：0．52465和0．57626，MB的熒光與Rh123和DiI的熒光的相關(guān)系數(shù)分別為：0．15391和0．66371。因此CPDI、CPD2和MB既定位于SGC-7901細(xì)胞的線粒體，也定位于細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)上。CPD1

5、和MB在線粒體上分布的量比在膜結(jié)構(gòu)上分布的量少，CPD2在線粒體和膜結(jié)構(gòu)上分布的量相近。 單純給予激光組和單純給予CPD1、CPD2或MB組的細(xì)胞死亡率與單純細(xì)胞組比較無(wú)差別（P>0．05）。CPD1、CPD2和MB介導(dǎo)的光動(dòng)力對(duì)SGC-7901細(xì)胞產(chǎn)生了明顯的殺傷效應(yīng)：當(dāng)CPD1、CPD2的濃度為0．125、0．25、0．5和1．0μg/mL時(shí)，兩者介導(dǎo)的光動(dòng)力對(duì)細(xì)胞的殺傷率分別為：20．56％、38．27％、76．20％、9

6、4．89％和17．04％、34．62％、68．26％、93．98％。當(dāng)CPD1和CPD2的濃度為1．5、2．0、和2．5μg/mL時(shí)，二者對(duì)SGC-7901細(xì)胞的光動(dòng)力殺傷率均為100％。在0．125-0．5μg/mL時(shí)，CPD1-PDT對(duì)細(xì)胞的殺傷效應(yīng)較CPD2-PDT（P<0．05）。觀察不同濃度的MB對(duì)細(xì)胞的PDT效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)0．5μg/mL的MB-PDT組的細(xì)胞死亡率為11．79％，與單純細(xì)胞組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）

7、。隨著MB濃度的增加，其介導(dǎo)的光動(dòng)力效應(yīng)逐漸增強(qiáng)，當(dāng)MB濃度為10．0μg/mL時(shí)，細(xì)胞死亡率為95．89％。細(xì)胞給予相同濃度的MB孵育不同時(shí)間后，MB-PDT引起的細(xì)胞死亡率在1、3、5分鐘組無(wú)差別；孵育10分鐘，MB即可對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生光動(dòng)力殺傷效應(yīng)，但該效應(yīng)未隨孵育時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。 結(jié)論： CPD1、CPD2和MB定位于SGC-7901細(xì)胞的線粒體和膜結(jié)構(gòu)上，因此，細(xì)胞的線粒體和膜結(jié)構(gòu)是三種光敏劑介導(dǎo)的光動(dòng)力作用的靶點(diǎn)。CPD