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1、目的: 通過(guò)轉(zhuǎn)染針對(duì)早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的誘騙寡核苷酸(Egr-1 decoy ODNs)的大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞增殖情況及早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)表達(dá)變化,探討針對(duì)早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1的誘騙寡核苷酸對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠平滑肌細(xì)胞增殖的影響和作用機(jī)制。
2、 方法: 通過(guò)組織塊貼壁法進(jìn)行原代大鼠動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)和鑒定,設(shè)計(jì)合成Egr-1誘騙、誘騙對(duì)照寡核苷酸,轉(zhuǎn)染人工合成的針對(duì)Egr-1的誘騙寡核苷酸(Egr-1decoy ODN),將培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞分為對(duì)照組(正常培養(yǎng)細(xì)胞)、誘騙組(轉(zhuǎn)染Egr-1的誘騙寡核苷酸)、誘騙對(duì)照組(轉(zhuǎn)染Egr-1誘騙雜碼寡核苷酸)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)治療前不同時(shí)間點(diǎn)(4h、24h、48h、72h)平滑肌細(xì)胞增殖情況與Egr
3、-1及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)變化,進(jìn)行圖像分析。所有數(shù)據(jù)均采用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,各組間比較應(yīng)用單因素方差分析,p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 成功進(jìn)行原代血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)培養(yǎng),經(jīng)細(xì)胞鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為高純度的血管平滑肌細(xì)胞。轉(zhuǎn)染Egr-1誘騙寡核苷酸后,用免疫組織化學(xué)法分別觀察各組不同時(shí)間點(diǎn)的
4、Egr-1和PCNA表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):Egr-1在三個(gè)實(shí)驗(yàn)組中均有表達(dá),1h表達(dá)最強(qiáng),隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì); PCNA在三個(gè)實(shí)驗(yàn)組內(nèi)4h開(kāi)始表達(dá),24h到最高峰,之后呈略下降趨勢(shì)。在不同時(shí)間點(diǎn),誘騙轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組相比,均在一定程度上抑制了Egr-1和PCNA表達(dá),經(jīng)SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,證明有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)Egr-1是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子,可以促進(jìn)VSME增殖。體外
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