β1整合素反義寡核苷酸聯(lián)合順鉑對卵巢癌體外侵襲性的影響.pdf

1、目的:觀察β1整合素表達(dá)下調(diào)對卵巢癌細(xì)胞生長，侵襲及對化療藥物敏感性的影響，研究β1整合素反義寡核苷酸聯(lián)合順鉑對卵巢癌細(xì)胞增殖與侵襲的作用，探討β1整合素作為腫瘤基因治療一個新的靶點(diǎn)的可行性。
　　方法：體外培養(yǎng)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞，預(yù)實(shí)驗(yàn)1.優(yōu)化反義復(fù)合物，倒置熒光顯微鏡篩選最佳轉(zhuǎn)染效果組。2.不同濃度β1整合素ASODN轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞， MTT法確定最佳實(shí)驗(yàn)濃度。3.不同濃度DDP作用細(xì)胞，MTT法確定最佳實(shí)驗(yàn)濃度。實(shí)驗(yàn)

2、：取對數(shù)生長期 SKOV3細(xì)胞，分組：細(xì)胞對照組(不行藥物處理)，正義鏈組(轉(zhuǎn)染β1 integrin SODN)，反義鏈組(轉(zhuǎn)染β1 integrin ASODN)，DDP組(DDP作用)，反義鏈+DDP組(轉(zhuǎn)染β1 integrin ASODN24小時后10mg/l DDP作用24小時)。進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：1.倒置光學(xué)顯微鏡(100×)觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；2.應(yīng)用MTT法檢測各組細(xì)胞生長抑制率；3. Transwell侵襲小室建立腫

3、瘤細(xì)胞侵襲模型(鋪 Matrigel基質(zhì)膠)，計算各組細(xì)胞穿膜數(shù)，評價侵襲能力改變；4.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測β1整合素mRNA表達(dá)在各組間的差異。實(shí)驗(yàn)：取對數(shù)生長期 SKOV3細(xì)胞，分組：單純化療組(不行轉(zhuǎn)染)，正義鏈+化療組(轉(zhuǎn)染β1 integrin SODN)，反義鏈+化療組(轉(zhuǎn)染β1 integrin ASODN)，培養(yǎng)24小時后，分別加入不同濃度的DDP作用24小時，MTT法檢測各組細(xì)胞生長抑制率，Log

4、it法計算IC50(半數(shù)抑制濃度)，觀察ASODN對化療藥物敏感性的影響。
　　結(jié)果：β1 integrin ASODN和DDP對SKOV3細(xì)胞都具有一定程度的凋亡誘導(dǎo)作用，取β1 integrin ASODN單一治療最適宜濃度為400nmol/l，細(xì)胞凋亡率達(dá)(65.10±5.659)％，取DDP最適宜濃度為10mg/l，細(xì)胞凋亡率為(39.20±4.1010%。β1整合素反義寡核苷酸可以下調(diào)β1 integrin mRNA的表

5、達(dá)，其水平下降到(47.53±0.4)%，明顯抑制卵巢癌細(xì)胞增殖，生長抑制率可達(dá)(50.60±2.26)%，可以降低卵巢癌細(xì)胞侵襲能力，平均穿膜數(shù)降為(28.40±2.31)個/200倍視野，與DDP合用可以降低化療藥物的IC50，由(15.27±0.45) mg/l降為(7.8±0.68)mg/l，數(shù)據(jù)與對照組相比，具明顯差異性，統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果， P＜0.05，對細(xì)胞形態(tài)改變明顯并促使其凋亡。β1 integrin ASODN聯(lián)合 D

6、DP治療組對卵巢癌細(xì)胞抑制率達(dá)(61.60±0.85)%，對β1 integrin mRNA表達(dá)的抑制率為(32.29±3.17)%，細(xì)胞穿膜數(shù)平均為(17.00±1.58)個/200倍視野，與對照組、SODN組、DDP和ASODN組相比較，均具有顯著差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論：β1整合素反義寡核苷酸有效抑制了卵巢癌的細(xì)胞增殖，驗(yàn)證了β1整合素可以增強(qiáng)卵巢癌的惡性增殖能力。通過反義寡核苷酸下調(diào)β1 integrin的表達(dá)，顯

7、著增強(qiáng)了卵巢癌對順鉑的敏感性，提示β1 integrin高表達(dá)是卵巢癌對順鉑不敏感的重要因素，抑制基因表達(dá)可以提高臨床治療效果。β1 integrin ASODN可以明顯降低卵巢癌的侵襲能力，效果強(qiáng)于傳統(tǒng)化療藥順鉑，體外實(shí)驗(yàn)?zāi)M了β1整合素可以介導(dǎo)卵巢癌的浸潤轉(zhuǎn)移，為針對性的基因治療提供可靠工具。反義寡核苷酸經(jīng)陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法可特異性封閉靶基因，具低毒性不易耐藥等特點(diǎn)，優(yōu)于現(xiàn)有化療藥物，與后者合用可以減少后者用量從而減輕不可逆轉(zhuǎn)的毒副