反義寡核苷酸聯(lián)合維甲酸治療口腔鱗癌研究.pdf

1、『目的』腫瘤細(xì)胞實質(zhì)上是一種逃避了凋亡而永生化的細(xì)胞群?？刂萍?xì)胞永生化的端粒酶基因與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。針對端粒酶hTR亞基的反義寡核苷酸策略聯(lián)合細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑全反式維甲酸抑制端粒酶活性是一種極具潛力的腫瘤治療新方法?？谇活M面部腫瘤以鱗狀細(xì)胞癌最為常見。鱗癌的治療始終是口腔頜面頭頸腫瘤外科的研究重點。本實驗為上述治療方法在口腔鱗癌中的研究。 『方法』建立人口腔鱗癌荷瘤鼠體內(nèi)實驗動物模型及人口腔鱗癌Tca8113細(xì)胞體外生長

2、、干預(yù)模型。給予反義寡核苷酸、全反式維甲酸、以及聯(lián)合用藥處理方式干預(yù)，觀察腫瘤細(xì)胞生長、端粒酶活性、凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)變化情況，了解上述干預(yù)措施對于腫瘤細(xì)胞生長的影響，并分析其可能機(jī)制。端粒酶活性由端粒重復(fù)序列擴(kuò)增－酶聯(lián)免疫吸附法檢測，細(xì)胞生長及腫瘤大小變化情況繪制成生長曲線，腫瘤細(xì)胞凋亡率由Annexin V/PI 染色法檢測，hTERT蛋白表達(dá)情況由Western Blot方法檢測?？沟蛲龅鞍譈cl-2及促凋亡蛋白Bax表達(dá)情況由免

3、疫組化法檢測，腫瘤標(biāo)本以透射電鏡檢查超微結(jié)構(gòu)。 『結(jié)果』在體內(nèi)、外實驗中，均發(fā)現(xiàn)反義寡核苷酸和全反式維甲酸具有抑制腫瘤生長、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制端粒酶活性的作用。腫瘤細(xì)胞凋亡率檢測表明，處理組腫瘤細(xì)胞凋亡率均較對照組明顯升高。腫瘤組織免疫組化檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白表達(dá)下降，Bax表達(dá)無明顯影響，各處理組端粒酶活性表達(dá)下降，腫瘤標(biāo)本電鏡檢查發(fā)現(xiàn)處理組腫瘤細(xì)胞中有典型凋亡細(xì)胞結(jié)構(gòu)及凋亡小體存在。聯(lián)合應(yīng)用兩種干預(yù)措施的處理組上述抑制