聯(lián)合轉染反義寡核苷酸治療胰腺癌和MRI動態(tài)觀測的實驗研究.pdf

1、Y 9 5 7 3 7 3研式博士學位論文( 2 0 0 6 屆)聯(lián)合轉染反義寡核菩酸治療胰腺癌和M R I 動態(tài)觀測的實驗研究E m p i r i c a lS t u d y o f C o t r a n s f e c t i n gA n t i s e n s e O l i g o n u c l e o t i d ef o r T r e a t i n gH u m a n P a n c r e a t i cC

2、 a n c e r a n dO b s e r v i n g w i t hM R J D y n a m i c a l l y研究生姓名 塹墮盎指導教師姓名 塞疊量( 鏨撞)專業(yè)名稱 囪盟鱟研究方向 監(jiān)擅瘞癌盆主受堡堂淪文提交日劃 ：2 Q Q 魚生生旦聯(lián)臺轉染反義寡核苷酸治療胰腺痛和M R I 動態(tài)觀測的實驗研究 中文摘蟹同時證明P C R ．S S P 法簡單、快速、準確。二、聯(lián)合應用K - r a s 和1 6 F -

3、IR 反義寡核苷酸對人胰腺癌細胞株P a t u 8 9 8 8調節(jié)作用的影響1 ．目的：采用針對K —r a S 點突變的反義寡核苷酸和I G F 一1R 反義寡核菅酸聯(lián)合應用對人胰腺癌細胞株P a t u 8 9 8 8 進行了體外治療試驗，對聯(lián)合應用反義寡核苷酸的效果進行評價，并對其機制進行探討。2 ．材料和方法：根據P a t u8 9 8 8 細胞株K —r a s 第1 2 密碼子點突變形式G T T ，設計出與之互補反義寡

4、核苷酸( K ．r a s ．m u t ) ，同時根據K - r a s e D N A 帽區(qū)序列設計與K —r a s 基因帽區(qū)反義寡核苷酸( K —r a s —c a p ) 。I G F ．IR 的反義寡核苷酸序列選用經較多科研單位證實效果較好的序列( I G F —I R ) 。采用M T T 法確定反義寡核苷酸的最佳有效劑量、篩選K - r a s —m u t 和K —r a s ·c a p 中抑制效果優(yōu)者，

5、并選擇反義寡核苷酸作用最佳時間點。通過倒置相差顯微鏡和細胞集落試驗進一步觀察反義寡核苷酸對細胞抑制的效果。通過流式細胞儀檢測K ．r a s 蛋白和I G F ．IR 蛋白表達率以及細胞凋亡率，R T - P C R檢測K ．r a s 和I G F —IR m R N A 表達。并采用電鏡觀察用藥后的細胞器微觀變化。3 ．結果：M T T 檢測結果表明采用1 6 u g ／m l 的藥物濃度對腫瘤細胞產生較好的抑制作用，K ．r a

6、s ．m u t A S O D N 抑制效果優(yōu)于K —r a s - c a p A S O D N ，藥物抑制作用最佳時間點為4 8 h 。倒置相差顯微鏡觀察和細胞集落試驗都證實聯(lián)合用藥對細胞生長產生明顯抑制作用。蛋白和m R N A 檢測結果證實反義寡核苷酸均可以抑制其相應的蛋白和m R N A 表達，聯(lián)合用藥組的凋亡率最高。電鏡從微觀影像角度證實聯(lián)合用藥導致細胞凋亡。4 ．結論：聯(lián)合應用反義寡核苷酸可以對體外培養(yǎng)的胰腺癌細胞產生