靶向胰島素樣生長(zhǎng)因子1型受體的反義寡核苷酸抗腫瘤研究.pdf

1、胰島素樣生長(zhǎng)因子l型受體(IGFlR)在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中均有過(guò)量表達(dá)，它參與細(xì)胞的增殖，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，因此以IGFlR為靶點(diǎn)逐漸成為未來(lái)腫瘤治療的新思路。本課題旨在研究靶向IGFlRmRNA的反義寡核苷酸(ASODN)在體內(nèi)外的抗腫瘤作用以及與傳統(tǒng)的放療、化療聯(lián)用時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，主要從事了以下三方面工作。 1.IGFlR-AS體外抗腫瘤研究 首先采用MTS還原法建立了反義藥物IGFlR-AS

2、的抗瘤譜，對(duì)其廣譜性進(jìn)行評(píng)價(jià)。試驗(yàn)中選擇12株人源腫瘤細(xì)胞株，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染不同濃度的IGFlR-AS于細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染72小時(shí)后MTS試劑顯色并計(jì)算其對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制率。各株腫瘤細(xì)胞重復(fù)試驗(yàn)一次。結(jié)果顯示，IGFlR-AS在體外對(duì)12株人腫瘤細(xì)胞的增殖均有不同程度的抑制作用，ICso值范圍為O．122pmol／L-0．477pmol／L。 以肝癌細(xì)胞HepG2為對(duì)象，轉(zhuǎn)染不同濃度的IGFlR-AS。結(jié)果顯示，與正義鏈、突變鏈對(duì)照

3、組相比較，IGFlR-AS可以特異地降低mRNA和蛋白的水平，抑制細(xì)胞的增殖，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。當(dāng)IGFlR-AS濃度達(dá)到0．8gmol／L時(shí)，細(xì)胞增殖、mRNA以及蛋白的抑制率分別為85．0％，74．5％和87．0％。 2．IGFlR-AS體內(nèi)抗腫瘤研究 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中建立人肝癌裸鼠原位移植模型，通過(guò)尾靜脈給藥IGFlR-AS75mg／kg/次、50mg／kg／次、25mg／kg/次三個(gè)劑量組，50mg/kg／次正義鏈對(duì)

4、照組，陽(yáng)性對(duì)照藥物5一氟尿嘧啶(5~FU)的劑量為lOmg&/kg/次及生理鹽水對(duì)照組。結(jié)果表明，與其它對(duì)照組相比，IGFlR-AS可以有效抑制裸鼠原位移植瘤的生長(zhǎng)、IGFlR蛋白表達(dá)，對(duì)肝癌術(shù)后腫瘤的生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移也有一定的抑制作用，當(dāng)用藥達(dá)到75mg／kg/次，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)、體內(nèi)蛋白表達(dá)、術(shù)后復(fù)發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)、肺部轉(zhuǎn)移的抑制率分別為74．1％、87．34％、65．32％和50％。觀察裸鼠體重、外周血均不受影響。 3．IGFlR-