肝靶向納米制劑的生物特性及藥動(dòng)、藥效學(xué)研究.pdf

1、研究目的 制備用于治療肝腫瘤的肝靶向制劑，其意義在于探索解決化療的主要問題：缺乏具有選擇性的抗癌藥物，致使毒副作用影響腫瘤的治療效果和患者的依從性。靶向制劑中的納米微粒給藥系統(tǒng)是采用高分子材料將藥物包裹在微粒中，由于納米粒粒徑小，以及所使用的載體材料的特性，導(dǎo)致納米微粒給藥系統(tǒng)在體內(nèi)分布有其特殊性，改變了藥物原有的體內(nèi)分布特性，從而達(dá)到靶向治療目的。 主要研究方法、內(nèi)容和結(jié)論 1.注射用絲裂霉素聚氰基丙烯酸正丁酯

2、納米粒(MMC-PBCA-NP)的工藝研究 采用乳化聚合法，以聚氰基丙烯酸正丁酯(PBCA)為載體材料、MMC為模型藥物，在乳化介質(zhì)pH6.18條件下制備了粒徑適宜的MMC-PBCA-NP，透射電鏡下觀察外觀為圓球形，無粘連，數(shù)均粒徑(Dn)=(104.1±10.14)nm，包封率(EE)=(86.56±4.20)％，載藥量(DL)=(7.4±0.32)％，多分散系數(shù)(Q)=0.17±0.024。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選制備過程中穩(wěn)

3、定劑、單體的用量，結(jié)果制備的最佳條件為：以1％Dextran70、0.1％Poloxamer為穩(wěn)定劑，1％氰基丙烯酸正丁酯(BCA)。對(duì)投藥量，制劑的干燥、消毒等工藝進(jìn)行單因素優(yōu)選，MMC投藥量為0.4％，制劑在無菌操作條件下制備，采用20000rpm超速離心純化，5％乳糖為支架劑冷凍干燥。建立了注射用MMC-PBCA-NP的制備工藝。 2.MMC-PBCA-NP的表征 對(duì)pH6.18條件下制備的MMC-PBCA-NP利

4、用GPC進(jìn)行了表征。pH2.14聚合條件下制備的PBCA-NP平均分子量(Mn)為16700，pH6.18聚合條件下制備的PBCA-NP平均分子量(Mn)為23500。建立高效液相色譜法(HPLC)測定MMC-PBCA-NP中MMC含量的方法。MMC在5～250μg.mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998；平均回收率為98.68％，精密度RSD為1.52％。色譜柱為Merck公司LiChroCARTC18色譜柱(250

5、×4mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-混合磷酸鹽緩沖液(15：85)；待測制劑用丙酮破乳，流動(dòng)相提取MMC。 3.PBCA-NP的生物相容性研究 采用體外細(xì)胞(L-02)培養(yǎng)，溶血試驗(yàn)及新西蘭白兔體內(nèi)炎癥反應(yīng)等體內(nèi)外試驗(yàn)對(duì)藥物載體PBCA-NP進(jìn)行了毒性評(píng)定。MTT法試驗(yàn)表明PBCA-NP在濃度低于28.56μg·mL-1時(shí)對(duì)培養(yǎng)的L-02細(xì)胞無細(xì)胞毒性。體內(nèi)炎癥反應(yīng)試驗(yàn)表明PBCA-NP皮下和肌肉埋植處的炎癥反應(yīng)是外界異物

6、刺激所產(chǎn)生，90天內(nèi)癥狀逐漸減弱直至消失。溶血試驗(yàn)表明PBCA-NP無溶血性。PBCA-NP具有良好的生物相容性，屬無毒級(jí)載體，初步認(rèn)為可用于制備注射劑。 4.MMC-PBCA-NP急性毒性試驗(yàn) 采用KM小鼠單劑量腹腔注射MMC和MMC-PBCA-NP，觀察14天，記錄其毒性反應(yīng)情況及死亡率，計(jì)算制劑的LD50。結(jié)果MMC和MMC-PBCA-NP的LD50分別為13.6，54.3mg.kg-1，其95％可信區(qū)間分別為11

7、.4～16.4，37.3～78.9mg.kg-1。 5.MMC-PBCA-NP的體內(nèi)的分布及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)研究 采用KM小鼠分別靜脈注射MMC-PBCA-NP與MMC兩種制劑，比較其主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。采用HPLC法測定血及各臟器中的MMC濃度，計(jì)算血藥濃度及體內(nèi)分布的變化。血藥濃度的變化取8個(gè)時(shí)間點(diǎn)5、15、30、40、60、180、360、720min；體內(nèi)分布取6個(gè)時(shí)間點(diǎn)5、30、180、360、720、1440min

8、。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只小鼠。MMC-PBCA-NP與MMC兩種制劑的主要藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)之間有顯著性差異，體內(nèi)分布也有顯著性差異。與MMC比較MMC-PBCA-NP的T1/2顯著延長(2.93倍)，AUC顯著增大(3.29倍)，CL顯著減小(0.30倍)，MRT顯著增大(2.75倍)；分布于肝的藥物量顯著增加，分布于心、腎和肺的藥物量顯著減少。MMC-PBCA-NP的肝相對(duì)靶向效率(RTE)為6.95，靶向效率(DTE)為2.12。 6

9、.MMC-PBCA-NP藥效學(xué)研究 采用新西蘭兔，VX2瘤株原位肝移植腫瘤模型對(duì)制劑進(jìn)行藥效學(xué)研究。以生理鹽水為陰性對(duì)照，MMC為陽性對(duì)照，試驗(yàn)組分三個(gè)劑量組。劑量的設(shè)定以臨床上MMC人用的常用劑量換算成兔用劑量。分別耳沿靜脈注射MMC0.29mg.kg-1，MMC-PBCA-NP低劑量組0.09mg.kg-1，MMC-PBCA-NP中劑量組0.29mg.kg-1，MMC-PBCA-NP高劑量組0.92mg.kg-1。采用CT掃

10、描確定治療前后腫瘤的體積，MMC-PBCA-NP組瘤體積抑制率為74.04％(低劑量)、82.70％(中劑量)、消退率為3.22％(高劑量)，明顯高于MMC組(67.68％，P＜0.05)；治療結(jié)束后分離腫瘤，用分析天平稱量腫瘤質(zhì)量，MMC-PBCA-NP組瘤重抑制率為70.49％(低劑量)、80.06％(中劑量)、82.14％(高劑量)，明顯高于MMC組(50.51％，P＜0.01)；MMC-PBCA-NP組的中位生存時(shí)間為65d(低