Bmi-1和miR-616在胃腸腫瘤中對西妥昔單抗治療敏感性的影響.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 Bmi-1在胃腸腫瘤中對西妥昔單抗和伊立替康治療敏感性的影響及機(jī)制研究
　　背景:Bmi-1是PcG家族的一員，是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子。Bmi-1在許多腫瘤中高表達(dá)，且與不良預(yù)后有關(guān)。已發(fā)現(xiàn)Bmi-1與胰腺癌化療抵抗相關(guān)，在乳腺癌中還可以誘導(dǎo)放療抵抗。但至今仍無Bmi-1與西妥昔單抗(C225)治療敏感性的研究報道。
　　目的：在于探索Bmi-1在胃腸腫瘤中對西妥昔單抗和伊立

2、替康治療敏感性的影響，為之后腫瘤靶向治療的新靶點提供基礎(chǔ)。
　　方法:利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000分別將Bmi-1過表達(dá)質(zhì)粒和Bmi-1 siRNA和轉(zhuǎn)染至MKN45、SGC7901和HT-29細(xì)胞，從而改變細(xì)胞內(nèi)Bmi-1表達(dá)水平。利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將miR-21過表達(dá)質(zhì)粒和Bmi-1 siRNA共轉(zhuǎn)染至MKN45細(xì)胞。采用不同濃度的C225或化療藥伊立替康處理細(xì)胞，CCK-8法檢測細(xì)胞

3、毒性?；仡櫺苑治?7例采用二線C225聯(lián)合FOLFIRI方案(伊立替康+5-Fu)化療的晚期胃癌患者，免疫組化方法檢測胃癌患者腫瘤標(biāo)本Bmi-1表達(dá)，比較Bmi-1陰性組與陽性組患者的緩解率差別。
　　結(jié)果:1.上調(diào)Bmi-1后，MKN45細(xì)胞對西妥昔單抗敏感性無顯著變化(P＞0.05)，對伊立替康敏感性下降(P＜0.05)。2.上調(diào)Bmi-1后，SGC7901細(xì)胞對西妥昔單抗和伊立替康敏感性均下降(P＜0.05)。3.下調(diào)Bmi

4、-1后，MKN45和SGC7901細(xì)胞對兩妥昔單抗和伊立替康敏感性均升高。4.共轉(zhuǎn)染實驗中，上調(diào)miR-21可逆轉(zhuǎn)Bmi-1下調(diào)所帶來的MKN45細(xì)胞對西妥昔單抗和伊立替康敏感性的升高;5.腫瘤組織中Bmi-1陰性對比Bmi-1陽性，ORR略有提高，但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.226)。
　　結(jié)論:Bmi-1高表達(dá)可引起胃腸癌細(xì)胞對西妥昔單抗及伊利替康的治療敏感性下降;Bmi-1低表達(dá)可引起胃腸癌細(xì)胞對西妥昔單抗及伊利替康的敏感性

5、上升;Bmi-1通過miR-21對西妥昔單抗和伊立替康敏感性產(chǎn)生影響。
　　第二部分 miR-616在胃腸腫瘤中對西妥昔單抗治療敏感性的影響
　　背景:表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)是一種廣泛分布于人體各組織細(xì)胞膜上的多功能糖蛋白，是目前靶向治療的主要靶點之一。西妥昔單抗(cetuximab，C225)是抗EGFR的人鼠嵌合單克隆抗體，已被廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸

6、癌患者的一線、二線或三線治療中。目前，西妥昔單抗明確的療效預(yù)測因子包括K-RAS與N-RAS基因。但研究顯示，僅有部分RAS野生型mCRC患者對C225有效。miRNA是一類內(nèi)生的、長度約19-25個核苷酸的非編碼小RNA，參與了細(xì)胞分化、細(xì)胞周期的進(jìn)展以及細(xì)胞凋亡的調(diào)控。最近的研究發(fā)現(xiàn)一些miRNA與抗EGFR治療的敏感性相關(guān)。我們擬研究miR-616與西妥昔單抗靶向治療敏感性的關(guān)系，為miR-616成為靶向治療的新靶點提供一定依據(jù)。

7、
　　方法:qRT-PCR檢測胃腸癌細(xì)胞與正常胃腸粘膜細(xì)胞miR-616的表達(dá)水平;利用脂質(zhì)體Lipofectamine2000將miR-616的模擬物mimics、阻遏物inhibitors轉(zhuǎn)染至MKN45和HT-29細(xì)胞;采用不同濃度的C225或化療藥伊立替康處理細(xì)胞，CCK-8法檢測細(xì)胞毒性。軟件預(yù)測結(jié)合qRT-PCR驗證篩選miR-616可能的靶基因。
　　結(jié)果:1.miR-616在胃腸癌細(xì)胞中高水平表達(dá)。2.轉(zhuǎn)染m

8、iR-616 mimics后，MKN45對西妥昔單抗敏感性下降(P＜0.05)，對伊立替康敏感性無顯著變化(P＞0.05)。3.轉(zhuǎn)染miR-616 mimics后，HT-29細(xì)胞對西妥昔單抗敏感性顯著下降(P＜0.01)，對伊立替康敏感性無顯著變化(P＞0.05)。4.轉(zhuǎn)染miR-616 inhibitors后，MKN45對西妥昔單抗敏感性略有上升，但無顯著差異(P＞0.05); HT-29對西妥昔單抗敏感性顯著上升(P＜0.05);兩

9、種細(xì)胞對伊立替康敏感性均無顯著變化(P＞0.05)。5.MKN45細(xì)胞、HT-29細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-616 mimics后， TP53BP2 mRNA表達(dá)水平明顯降低(P＜0.01);轉(zhuǎn)染miR-616 inhibitor后，TP53BP2 mRNA表達(dá)明顯增加(P＜0.01)。
　　結(jié)論:miR-616在胃腸癌細(xì)胞中高表達(dá)。miR-616在胃腸癌細(xì)胞中與西妥昔單抗的治療敏感性有關(guān)，與伊立替康治療敏感性無關(guān)。TP53BP2為miR-