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1、樹突狀細(xì)胞(DC)是體內(nèi)己知功能最強(qiáng)的專職性抗原提呈細(xì)胞(APC),能刺激初始型T淋巴細(xì)胞活化,從而啟動(dòng)機(jī)體特異性免疫應(yīng)答。DC在誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的作用,DC疫苗業(yè)已用于某些腫瘤的臨床免疫治療。IL-2是最早被發(fā)現(xiàn)的淋巴細(xì)胞因子之一,不僅在T淋巴細(xì)胞的克隆性增殖和活化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,而且可以促進(jìn)NK細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖分化。重組IL-2已被臨床作為治療性藥物應(yīng)用。近年來,小鼠DC分泌IL-2的生物學(xué)效應(yīng)已有研究,
2、但I(xiàn)L-2在人外周血單核細(xì)胞來源DC(Mo-DC)分化成熟和功能介導(dǎo)中的作用尚未見報(bào)導(dǎo)。 本文分析CD40信號(hào)和TNF-ot對(duì)體外誘導(dǎo)Mo-DC表達(dá)CD25(IL-2Ra)的調(diào)節(jié)作用,繼而著重研究CD40信號(hào)激發(fā)的Mo-DC能否表達(dá)功能性高親合力IL-2受體(IL-2R),在此基礎(chǔ)上觀察外源性IL-2對(duì)Mo-DC分化發(fā)育和功能的影響,以此探討IL-2/IL-2R在調(diào)節(jié)Mo-DC分化、發(fā)育和成熟過程中介導(dǎo)的作用,為Mo-DC疫苗的
3、研制及其在免疫治療中的應(yīng)用提供新的思路。 第一部分CD40信號(hào)對(duì)單核細(xì)胞來源DC表達(dá)IL-2R/IL.2的誘導(dǎo)作用及其相關(guān)生物學(xué)效應(yīng) 目的:比較抗人CD40激發(fā)型單抗和TNF-(z對(duì)Mo-DC體外誘導(dǎo)表達(dá)CD25(IL-2Rot)的作用,以及Mo-DC表面高親合力IL-2R的表達(dá),并進(jìn)一步探討外源性IL-2在Mo-DC分化成熟和功能介導(dǎo)中的生物學(xué)效應(yīng)。 方法:采用聯(lián)合GM-CSF和IL-4體外誘導(dǎo)Mo-DC的培養(yǎng)
4、方法,分別加入CD40單抗和TNF-a誘導(dǎo)Mo-DC成熟;免疫熒光標(biāo)記分析Mo-DC表型;Westemblotting檢測(cè)Mo-DCNF-r.B核轉(zhuǎn)位;共聚焦熒光顯微鏡和免疫共沉淀檢測(cè)高親和力IL-2受體的表達(dá);細(xì)胞免疫組化檢測(cè)IL-2的分泌;ELISA法和胞漿細(xì)胞因子測(cè)定IFN-~的分泌水平;3H-TdR摻入法分析Mo-DC對(duì)自體T細(xì)胞的促增殖效應(yīng)。 結(jié)果:(1)CD40信號(hào)能有效的誘導(dǎo)成熟Mo-DC上調(diào)表達(dá)CD25(IL-2
5、Rot),而TNF一α則無此作用。在CD40單抗激發(fā)24h后的Mo-DC細(xì)胞核內(nèi)能檢測(cè)到NF-r,B的亞基,而TNF-tt激發(fā)24h后的Mo-DC細(xì)胞核內(nèi)未能檢測(cè)到NF-r.B亞基的核轉(zhuǎn)位;(2)CD40單抗激發(fā)成熟的Mo-DC表達(dá)高親和力的IL-2受體,同時(shí)能夠誘導(dǎo)Mo-DC分泌IL-2: (3)外源性IL-2可進(jìn)一步促進(jìn)CD40激發(fā)的Mo-DC分泌IFN-y,同時(shí)3H-TdR摻入法的結(jié)果也顯示,在Mo-DC培養(yǎng)時(shí)加入外源性I
6、L-2可以增強(qiáng)Mo-DC對(duì)T細(xì)胞的促增殖作用。 結(jié)論:CD40單抗激發(fā)的Mo-DC上調(diào)表達(dá)CD25(IL-2Rct)并介導(dǎo)Mo-DC在早期的NF-r.B的核轉(zhuǎn)位,表達(dá)功能性高親和力IL-2受體;外源性IL-2能促進(jìn)Mo-DC分泌IFN-7和增強(qiáng)Mo-DC對(duì)T細(xì)胞的促增殖效應(yīng),IL-2及其受體在Mo-DC活化和功能介導(dǎo)中有重要意義。 第二部分CD40信號(hào)對(duì)Mo-I)C共表達(dá)CD83和CD25的誘導(dǎo)作用及機(jī)制 目的:
7、研究IL-2對(duì)人外周血單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞CD83表達(dá)的調(diào)節(jié)作用,探討CD40信號(hào)誘導(dǎo)的CD83和IL-2受體在Mo-DC生物學(xué)行為中的作用。 方法:采用聯(lián)合GM-CSF和IL-4體外誘導(dǎo)Mo-DC的培養(yǎng)方法,加入CD40單抗誘導(dǎo)Mo-DC成熟;免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)外源性IL-2對(duì)共刺激分子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用;共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)CD83和IL-2受體的分布。 結(jié)果:CD40信號(hào)激發(fā)的Mo-DC表達(dá)CD83和IL-2受體,兩
8、者在細(xì)胞膜上共定位;與單獨(dú)CD40單抗激發(fā)組相比,外源性IL-2可以上調(diào)共刺激分子CD25和CD83的表達(dá);在37~C時(shí),DC表面的高親和力IL-2受體與外源性IL-2相互作用,引起IL-2受體的內(nèi)化,同時(shí)CD83分子也內(nèi)化至細(xì)胞漿內(nèi),出現(xiàn)了CD25和CD83分子共內(nèi)吞現(xiàn)象,而在4~C時(shí)則沒有發(fā)生該現(xiàn)象。 結(jié)論:首先證實(shí)CD83和CD25分子在CD40信號(hào)激發(fā)的Mo-DC表面能夠相互作用,與Mo-DC的分化成熟相關(guān)并介導(dǎo)相應(yīng)的生
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