NEDD4在CD40信號通路中的作用及其機制研究.pdf

1、NEDD4(Neuronal precursor cell Expressed Developmentally Downregulated4，神經(jīng)前體細胞表達的發(fā)育下調(diào)基因4)蛋白質(zhì)屬于含HECT(Homologous to E6-APC-Terminus)結構域的泛素E3酶，從酵母到人類高度保守，結構上主要包括N末端的C2結構域，2-4個WW結構域和C末端的HECT結構域，其底物往往含有PY模序(包括LPxY和PPxY)。NEDD4已

2、報道底物包括PTEN、Rap2A、Cbl-b、Gag和NEaC等，生物學功能涉及T細胞成熟、神經(jīng)發(fā)育、病毒出芽釋放和膜受體的降解與內(nèi)化等。本實驗室前期工作應用質(zhì)譜技術鑒定A20細胞中CD40信號復合物的新組分，其中包括NEDD4，而目前未有報道稱NEDD4直接參與CD40相關通路的調(diào)控。因此，本課題研究了NEDD4在CD40引起的下游通路激活過程中所起的作用以及機制。在HEK293和A20細胞中，通過免疫共沉淀的方法發(fā)現(xiàn)NEDD4能與C

3、D40通路的重要介導子TRAF3發(fā)生相互作用，但與TRAF2之間不存在相互作用，同時NEDD4能明顯促進TRAF3的泛素化，而對TRAF2的泛素化則沒有影響，提示NEDD4可能是TRAF3的泛素E3酶。通過比較對照細胞和過表達NEDD4的A20細胞，對照細胞和NEDD4瞬時干涉的A20細胞以及對照細胞和NEDD4基因敲除的naive B淋巴細胞，發(fā)現(xiàn)NEDD4在一定程度上影響CD40信號通路下游蛋白質(zhì)p38的激活。由于NEDD4基因全身

4、敲除的小鼠胚胎致死，為了能得到NEDD4基因敲除的B淋巴細胞，我們通過胎肝移植的方法重建受體小鼠的免疫系統(tǒng)，成功得到了胎肝嵌合體。分離嵌合體小鼠的naive B淋巴細胞，通過PI染色和CFSE染色測定細胞的死亡和增殖，發(fā)現(xiàn)NEDD4對細胞的存活和增殖沒有影響。用CD43(Ly-48)MicroBeads負選naive B淋巴細胞時發(fā)現(xiàn)，NEDD4基因敲除的脾臟淋巴細胞中CD43陰性的細胞含量明顯增加。提示NEDD4在B細胞的發(fā)育及激活過