c-Abl非受體酪氨酸激酶調(diào)節(jié)蛋白酶體的穩(wěn)定性與組裝機理研究.pdf

1、c-Abl非受體型酪氨酸激酶在哺乳動物等細(xì)胞中廣泛表達(dá),通過NLS和NES在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間活躍穿梭。c-Abl在不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位具有相應(yīng)的生物學(xué)功能,通過蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA之間的相互作用及其激酶活性在細(xì)胞增殖、凋亡、DNA損傷修復(fù)以及細(xì)胞粘附、遷移等過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。染色體易位產(chǎn)生的Bcr-Abl和Tel-Arg中的Abl和Arg組成型活化,是導(dǎo)致慢性粒細(xì)胞白血病的主要原因。目前,對Abl激酶家族的研究主要集

2、中在其作為癌基因產(chǎn)物的致癌潛質(zhì)上,而對c-Abl和Arg的正常生理功能及其與下游靶分子的相互作用還知之甚少。
　　PSMA7是蛋白酶體的α4亞基,在蛋白酶體的組裝及亞細(xì)胞定位等方面具有十分重要的作用。通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩選c-Abl相互作用蛋白,發(fā)現(xiàn)PSMA7有可能與c-Abl相互作用。研究表明,c-Abl可以抑制PSMA7的泛素-蛋白酶體途徑降解;另外,c-Abl通過PSMA7亞基與蛋白酶體結(jié)合,使PSMA7酪氨酸磷酸化,進而顯

3、著抑制蛋白酶體的肽酶活性。本研究通過一系列免疫沉淀、免疫印跡、GST-pull down、LC-MS/MS以及體內(nèi)外泛素化分析實驗證明,c-Abl可以通過其激酶活性調(diào)節(jié)PSMA7的泛素化及SUMO化修飾。進一步的研究證明,c-Abl通過抑制PSMA7亞基經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解,可以提高蛋白酶體復(fù)合物的穩(wěn)定,并且Hsp90、Tcp-γ等分子伴侶可能參與這種穩(wěn)定性調(diào)控。同時,我們發(fā)現(xiàn)乳腺癌易感蛋白BRCA1可以促進細(xì)胞內(nèi)PSMA7的泛素化

4、修飾而導(dǎo)致其降解,而c-Abl提高BRCA1在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平。我們認(rèn)為,c-Abl一方面通過直接的相互作用來穩(wěn)定PSMA7,另一方面,它可以通過提高BRCA1的細(xì)胞內(nèi)水平來促進PSMA7的降解。c-Abl激酶對蛋白酶體亞基的雙重調(diào)控作用體現(xiàn)了其功能的復(fù)雜性和精確性。
　　本次研究首次分析了c-Abl激酶對蛋白酶體亞基PSMA7泛素化修飾及穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)過程,并闡明c-Abl通過PSMA7來影響整個蛋白酶體復(fù)合物的穩(wěn)定性及組裝的機理