苯海索對(duì)β-淀粉樣蛋白-,25-35-介導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討苯海索(Trihexyphenidyl，THY)對(duì)Aβ25-35(β-淀粉樣蛋白25-35，beta-amyloidprotein25-35)介導(dǎo)的PC12細(xì)胞(大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞，pheochromocytomacell)損傷的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。 方法：運(yùn)用不同濃度的Aβ25-35(1，10，20，30，50μM)對(duì)PC12細(xì)胞進(jìn)行損傷，通過(guò)MTT法了解PC12細(xì)胞的損傷情況，確定出引起細(xì)胞損傷的最佳作用濃度，研

2、究苯海索和對(duì)照品維生素E的細(xì)胞保護(hù)作用；采用MDA，SOD以及GSH-PX等試劑盒檢測(cè)Aβ25-35對(duì)PC12細(xì)胞的氧化損傷，并研究苯海索的抗氧化作用及其機(jī)制，為進(jìn)一步確定苯海索的抗氧化特性，使用DCFH-DA結(jié)合熒光分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的水平；采用吖啶橙染色和熒光倒置顯微鏡觀察PC12細(xì)胞凋亡形態(tài)，用熒光分光光度計(jì)結(jié)合Rh123檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位的水平變化，并用鈣離子敏感的熒光探針Fura-2/AM檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度進(jìn)

3、一步研究苯海索的鈣拮抗作用。 結(jié)果：1，10μM的凝聚態(tài)Aβ25-35與PC12細(xì)胞共同孵育48小時(shí)可造成顯著損傷，而濃度為0.01μM，0.1μM，1μM的苯海索可明顯改善細(xì)胞形態(tài)，顯著提高PC12細(xì)胞的存活率，分別達(dá)到70.41％，73.46％，86.66％，且呈濃度依賴性。2，Aβ25-35可誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷，提高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，顯著降低細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX酶的活性，提高M(jìn)DA的含量，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激損

4、傷，苯海索可顯著降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平和MDA含量，顯著升高細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX的活性，對(duì)PC12細(xì)胞有顯著的抗氧化作用。3，熒光倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，10μM的Aβ25-35與PC12細(xì)胞共同孵育24小時(shí)，凋亡細(xì)胞顯著增加，不同濃度的苯海索預(yù)處理1小時(shí)，可使細(xì)胞形態(tài)明顯改善；通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)熒光染料羅丹明123(Rh123)的熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞線粒體膜電位的變化，不同濃度的苯海索可顯著抑制Aβ25-35引起的線粒體膜電位水平的降低；通過(guò)

5、檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度的變化表明苯海索可顯著抑制Ap25-35介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載。 結(jié)論：1，10μM的Aβ25-35可介導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷，觸發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度超載，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。2，不同濃度的苯海索預(yù)處理1小時(shí)可明顯抑制Aβ25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷和凋亡。苯海索的神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過(guò)清除細(xì)胞內(nèi)ROS，提高細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX的活性，降低MDA的水平，抑制細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞