玉郎傘多糖對淀粉樣蛋白聯(lián)合地塞米松誘導(dǎo)PC12細胞損傷的干預(yù)作用及其機制研究.pdf

1、目的:
　　本研究旨在探討玉郎傘多糖(YLSPS)對體外建立的擬阿爾海默茨病模型（PC12細胞）的干預(yù)作用;觀察淀粉樣蛋白25-35肽段(Aβ25-35)和地塞米松（Dexamethasone，DXM）聯(lián)合誘導(dǎo)PC12細胞時的活力損傷效應(yīng);及其作用在基因和蛋白水平上可能的相關(guān)機制，為進一步開發(fā)玉郎傘多糖在神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病的治療提供實驗參考。
　　方法:
　　1.Aβ25-35聯(lián)合DXM對PC12細胞的損傷效應(yīng)研究:(1

2、)根據(jù)干預(yù)因素不同，實驗分組分為四組，分別為:①空白對照組（不加任何藥物誘導(dǎo)）;②單用Aβ25-35誘導(dǎo);③單用DXM誘導(dǎo)④聯(lián)合誘導(dǎo)組（聯(lián)合應(yīng)用Aβ25-35與DXM）。(2)體外培養(yǎng)類神經(jīng)元PC12細胞，培養(yǎng)至85％細胞密度時，按照上述分組給予藥物誘導(dǎo)，作用24小時，分別從以下幾個方面進行檢測:①在倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)學(xué)變化;②采用CCK-8比色法檢測各組細胞增殖情況變化;③通過LDH法檢測各組細胞胞膜損傷程度變化;④通過

3、流式細胞儀以AnnexinⅤ-HTC/PI雙染法，檢測各組細胞早期及總凋亡率變化。
　　2.玉郎傘多糖對聯(lián)合藥物誘導(dǎo)的類神經(jīng)元PC12細胞擬阿爾海默茨病模型的干預(yù)作用的可能機制研究:培養(yǎng)至80％細胞密度時，根據(jù)上述分組給予藥物誘導(dǎo)和藥物干預(yù)，誘導(dǎo)藥物和干預(yù)藥物（玉郎傘多糖）前后各作用24小時，然后分別以熒光定量PCR法、免疫組織化學(xué)法檢測各組細胞中APP、Bax、Bcl-2、caspase-3的mRNA表達、蛋白表達水平;west

4、ern blot法檢測各組細胞Bax、Bcl-2蛋白表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.Aβ25-35和DXM在一定濃度范圍內(nèi)均對PC12細胞有毒性作用，且其毒性作用呈劑量依賴關(guān)系。在此基礎(chǔ)上，選擇10μM的Aβ25-35(24h)和0.0750μM的DXM(24h)聯(lián)合作用建立細胞損傷模型，培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的測定與CCK-8的結(jié)果基本一致，顯示玉郎傘多糖(YLSPS)劑量性依賴地減少了細胞中LDH的漏出;由流式細胞

5、儀檢測的結(jié)果表明，YLSPS可以減少模型細胞凋亡性死亡。
　　2.熒光定量PCR法結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組APP、Bax、caspase-3 mRNA的表達水平明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，玉郎傘多糖高組能降低APP、Bax、caspase-3的mRNA表達水平(P＜0.05)，而對Bcl-2 mRNA的表達水平影響不明顯(P＞0.05);玉郎傘多糖低劑量組能降低Bax、caspase-3 mRNA水平(P＜0.0

6、5)。
　　3.免疫組化結(jié)果顯示，與模型組比較，玉郎傘多糖各給藥組均能不同程度地下調(diào)APP、Bax、caspase-3，而上調(diào)Bcl-2蛋白的陽性表達(P＜0.05); western blot結(jié)果顯示，玉郎傘多糖高、中劑量組均能降低Bax蛋白表達(P＜0.05)，而提高Bcl-2蛋白表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.Aβ25-35聯(lián)合DXM作用于PC12細胞，可使細胞增殖受抑制，呈現(xiàn)凋亡損傷變化;