G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(GPR30)激動(dòng)劑G-1抑制人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移作用的研究.pdf

1、目的：血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)遷移在心血管系統(tǒng)疾病如動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤形成中具非常重要作用。雌激素在動(dòng)脈粥樣硬化形成及發(fā)展過(guò)程中具重要保護(hù)作用。GPR30(G-protein coupled estrogen receptor)作為雌激素受體可被雌激素及其特異性激動(dòng)劑G-1激活從而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移等功能。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)運(yùn)用GPR30特異性激動(dòng)劑G-1來(lái)研究GPR30激活對(duì)PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMC細(xì)胞遷移的影響，以及

2、GPR30激活對(duì)細(xì)胞遷移相關(guān)基因MMP2和MMP9表達(dá)及相關(guān)信號(hào)通路激酶的影響。
　　 方法：采用人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞系(human aortic smooth muscle cell，hASMCs)為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞，PDGF-BB作為誘導(dǎo)細(xì)胞遷移的外源因子。經(jīng)劃痕試驗(yàn)檢測(cè)G-1對(duì)細(xì)胞遷移作用的影響；通過(guò)RT-PCR及Western Blot方法檢測(cè)GPR30在hASMCs細(xì)胞系中的表達(dá)情況；并通過(guò)GPR30 siRNA干擾方法使GP

3、R30沉默，驗(yàn)證G-1對(duì)細(xì)胞遷移作用是否通過(guò)GPR30而產(chǎn)生；通過(guò)Real-time PCR及Western Blot方法檢測(cè)G-1激活GPR30對(duì)細(xì)胞遷移相關(guān)基因MMP2和MMP9表達(dá)的影響；用MAPK、EGFR抑制劑PD98059和AG1478檢測(cè)MAPK、EGFR激酶等信號(hào)通路是否參與G-1激活GPR30對(duì)細(xì)胞遷移的影響。
　　 結(jié)果：1.G-1抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的hASMCs細(xì)胞遷移，G-1處理8 h后具最佳抑制效果

4、，并且G-1對(duì)細(xì)胞遷移的抑制具有濃度依賴性。2.GPR30在hASMCs細(xì)胞中有表達(dá)。3.hASMCs細(xì)胞中GPR30表達(dá)沉默可逆反G-1抑制細(xì)胞遷移作用。4.G-1下調(diào)PDGF-BB誘導(dǎo)的MMP9表達(dá)，對(duì)MMP2表達(dá)沒(méi)有明顯影響。5.PD98059和AG1478不影響G-1對(duì)細(xì)胞遷移的抑制作用。
　　 結(jié)論：G-1通過(guò)激活GPR30受體而抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的hASMCs細(xì)胞遷移并具有濃度依賴性；G-1激活GPR30受體后下