雌激素受體GPR30在人子宮肌瘤以及血管平滑肌細胞中的作用和機理研究.pdf

1、第一部分雌激素受體GPR30在人子宮肌瘤中的作用和機理研究
　　目的:子宮肌瘤是最常見的一種婦科良性腫瘤，由平滑肌細胞異常增生而形成，主要發(fā)生于育齡期婦女，其最顯著的癥狀是月經過多、盆腔不適等。雌激素在子宮肌瘤的發(fā)病過程中具有重要作用。然而，在人子宮肌瘤和正常子宮肌細胞中，由雌激素受體GPR30介導17β-雌二醇所引起的細胞增殖作用卻未見報道。因此，本研究是為了探明G蛋白偶聯(lián)受體30(GPR30)在子宮肌瘤和與之相對應的子宮肌中的

2、表達差異，并探討GPR30在子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的作用機制，為子宮肌瘤的非手術治療提供理論依據(jù)。
　　方法和結果:人子宮肌瘤組織和子宮肌組織由天津中心婦產科醫(yī)院提供，來自于接受子宮切除術的病人，年齡在35-50歲之間，近三個月內無固醇類使用史。兩種組織中GPR30的表達被檢測，原代培養(yǎng)的細胞來源于這些子宮肌瘤組織和正常子宮肌組織。通過western blot和real-time PCR方法，我們發(fā)現(xiàn)與正常子宮肌組織相比，GPR

3、30在子宮肌瘤組織中高表達。在正常子宮肌組織中，僅有3/9的病人樣本通過western blot方法檢測到有GPR30蛋白表達，GPR30蛋白的表達水平遠低于GPR30蛋白在肌瘤中的表達水平，差異具有統(tǒng)計學意義。激光共聚焦顯微鏡掃描揭示了在子宮肌瘤組織和培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細胞中GPR30的核定位。0.1 mM17β-雌二醇(E2)分別處理兩種細胞后，子宮肌瘤平滑肌細胞中GPR30 mRNA的表達增加，但是在子宮平滑肌細胞中GPR30

4、mRNA的表達卻下調。GPR30激動劑G-1分別處理兩種細胞后，G-1同時上調了兩種不同類型細胞中p44/42有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化水平。不同的是，MEK抑制劑PD98059卻完全抑制了子宮平滑肌細胞中G-1誘導的p44/42的磷酸化，而子宮肌瘤平滑肌細胞則沒有這一現(xiàn)象。
　　結論:
　　1.GPR30在子宮肌瘤組織以及原代培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細胞中高表達。并且通過免疫熒光和激光共聚焦顯微鏡掃描，發(fā)現(xiàn)GP

5、R30在子宮肌瘤組織和原代培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細胞中，定位于細胞核。
　　2.E2刺激了原代培養(yǎng)的子宮肌瘤平滑肌細胞中GPR30 mRNA的表達。
　　3.在人子宮肌瘤平滑肌細胞和子宮平滑肌細胞中，GPR30選擇性激動劑G-1激活了p44/42 MAPK信號通路。
　　第二部分雌激素受體GPR30在血管平滑肌細胞中的作用和機理研究
　　目的:動脈粥樣硬化，是心臟疾病和中風的首要原因，其中，血管平滑肌細胞過度增殖是

6、動脈粥樣硬化等多種心血管疾病細胞病理學的發(fā)病基礎之一。雌激素對心血管系統(tǒng)具有保護作用。然而，雌激素對于ERs敲除的小鼠體內新生內膜的形成仍然具有抑制作用，這提示我們一個被稱為新型雌激素受體G蛋白偶聯(lián)受體30(GPR30)可能通過抑制平滑肌細胞的增殖，從而抑制新生內膜的形成。為了驗證以上假設，本研究探討了GPR30在抑制血管平滑肌細胞增殖作用中的分子機制，從而為以平滑肌過度增殖為病理基礎的疾病如動脈粥樣硬化等提供治療的理論依據(jù)。
　

7、　方法和結果:我們利用小鼠頸總動脈結扎所構建的新生內膜增生模型，檢測了GPR30特異性配體G-1的作用。正如期望的那樣，G-1的處理顯著抑制了由結扎誘導的新生內膜病變的發(fā)展。為了進一步揭示潛在的機制，我們檢測了G-1對培養(yǎng)的人血管平滑肌細胞的作用。在人血管平滑肌細胞中，G-1的處理顯著誘導了表皮生長因子受體(EGFR)的激活和磷酸化，和p44/42有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激活和磷酸化。綜上所述，我們的結果顯示G-1抑制新生內