衣霉素在血管平滑肌細胞增殖和遷移中的作用及分子機制研究.pdf

1、由外源性刺激誘發(fā)的血管平滑肌細胞的增殖和遷移，是誘發(fā)動脈粥樣硬化和血管再狹窄的重要原因。近期的研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)與多種外源性刺激導致的血管平滑肌細胞的病理、生理活動密切相關(guān)。近年來針對動脈粥樣硬化疾病發(fā)展過程中ERS的研究方興未艾，但研究對象主要集中在損傷的內(nèi)皮細胞和巨噬細胞中，而對于血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs

2、)中ERS的作用及機制研究相對較少。本課題關(guān)注于ERS在VSMCs中可能產(chǎn)生的作用及作用機制，為動脈粥樣硬化疾病的預(yù)防和治療提供參考。
　　衣霉素(tunicamycin，Tm)作用于VSMCs后可產(chǎn)生明顯ERS?，F(xiàn)象包括:產(chǎn)生明顯的XBP1的mRNA剪切，并且使ATF6、Bip和CHOP的mRNA表達量以及XBP1s、Grp94和Bip蛋白的表達量呈劑量依賴性上升。然而通過CCK-8及MTT實驗證明Tm對于VSMCs的細胞活力影

3、響有限。Annexin-V-FITC/PI雙染實驗結(jié)果表明Tm僅誘導產(chǎn)生輕微的細胞凋亡。
　　本研究中我們通過溴脫氧尿苷(BrdU)摻入法和形態(tài)學觀察的方法首次發(fā)現(xiàn)預(yù)孵Tm能夠顯著地劑量依賴性地抑制由血小板衍生生長因子(platelet-derived growthfactor，PDGF)誘導的VSMCs的增殖。同時我們也首次通過劃痕實驗和遷移小室(Transwell)實驗發(fā)現(xiàn)Tm具有明顯抑制PDGF刺激的VSMCs遷移運動的效果

4、，并且具有劑量依賴性。在分子水平上我們檢測了增殖細胞核抗原(PCNA)和基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）的蛋白表達水平以及MMP-2的活性，證實Tm能夠降低PDGF刺激的VSMCs中PCNA和MMP-2蛋白的活性。
　　經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)Tm作用于PDGF刺激的VSMCs可以引起細胞中血紅素加氧酶1(heme oxygenase-1，HO-1)的mRNA和蛋白表達量的升高，并降低ERK1/2的磷酸化水平和活性。Tm的負調(diào)控作用與cyclin

5、 E-CDK2和cyclin D1-CDK4蛋白活性降低和p27的活性升高有關(guān)。更重要的是，HO-1的siRNA可以部分抵消Tm抑制PDGF-BB誘導的VSMCs增殖和遷移的作用。上述結(jié)果說明Tm對VSMCs增殖和遷移的影響是通過誘導HO-1表達、抑制ERK1/2信號通路的活化、阻滯細胞周期進程使之停留在G1/S期等機制共同作用產(chǎn)生的。另外，Tm可以降低PDGF作用產(chǎn)生的MCP-1、PAI-1和OPN等部分炎癥因子的基因表達水平。