GPR30在子宮平滑肌瘤細(xì)胞增殖中的作用研究.pdf

1、目的：子宮肌瘤是婦科的常見病，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。大量的研究表明子宮平滑肌瘤的發(fā)生與雌激素的關(guān)系密切。傳統(tǒng)雌激素核受體ERα、β作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子已被廣泛接受，但是大量的研究表明子宮肌瘤患者和正常育齡期婦女的循環(huán)血液中雌激素的水平?jīng)]有明顯差異，這提示子宮肌瘤的發(fā)生與局部的雌激素效應(yīng)有關(guān)?？缒蛋白偶聯(lián)受體(GPR30)（G protein-coupled receptors， G蛋白偶聯(lián)受體）分子量大小約40KD，基因定位于染色體7p22

2、上，主要位于細(xì)胞質(zhì)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，是激活ERK-1/2的另一類主要的跨膜信號受體蛋白。GPR30有α、β、γ、和δ四個亞基。多項(xiàng)研究證實(shí)GPR30可與雌激素特異性結(jié)合快速介導(dǎo)雌激素效應(yīng)，這可能與育齡婦女子宮局部高雌激素效應(yīng)的表達(dá)有關(guān)。本研究希望可以進(jìn)一步探索GPR30在子宮肌瘤發(fā)病中的作用。
　　方法：⑴取材，子宮平滑肌瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)成功后7-8天傳代。⑵平滑肌瘤細(xì)胞鑒定，應(yīng)用HE染色法，在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞大小、形態(tài)、生

3、長特點(diǎn)及排列方式等進(jìn)行平滑肌瘤細(xì)胞鑒定。⑶免疫熒光法分析GPR30在子宮平滑肌瘤細(xì)胞中的表達(dá)。⑷蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測子宮肌瘤細(xì)胞中GPR30的表達(dá)。⑸蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測未處理組子宮肌瘤細(xì)胞及添加雌二醇的子宮肌瘤細(xì)胞在培養(yǎng)24h、48h后細(xì)胞中Erk1/2表達(dá)的差異。⑹蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測正常子宮肌瘤細(xì)胞及GPR30-siRNA轉(zhuǎn)染的子宮肌瘤細(xì)胞在培養(yǎng)24h、48h

4、后細(xì)胞中Erk1/2表達(dá)的差異。⑺使用MTT方法并以時間和OD570數(shù)值繪制細(xì)胞生長曲線。
　　結(jié)果：①培養(yǎng)1天后，大部分細(xì)胞已貼壁。換液后3天貼壁細(xì)胞完全伸展。多數(shù)呈長梭型，細(xì)胞伸出較長的突起并相互接觸，部分區(qū)域可見典型的“峰—谷”結(jié)構(gòu)，培養(yǎng)7-8天細(xì)胞鋪滿瓶底，并鑒定為平滑肌細(xì)胞。②Western Blot檢測人子宮肌瘤以及正常子宮平滑肌組織中GPR30蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示GPR30在子宮平滑肌瘤和正常子宮平滑肌組織中皆有

5、表達(dá)。③Western Blot表明在雌激素的作用下，子宮平滑肌瘤細(xì)胞中Erk1/2的表達(dá)較未處理組正常子宮平滑肌瘤細(xì)胞顯著升高;經(jīng)siRNA干擾GPR30后，干擾組子宮平滑肌瘤細(xì)胞中Erk1/2的表達(dá)顯著低于未處理組平滑肌細(xì)胞。④細(xì)胞生長曲線分析顯示，在雌激素的刺激下，空白載體對照組細(xì)胞的生長明顯上升（OD數(shù)值增加），GPR30干擾組細(xì)胞的生長活性和生存率顯著下降。
　　結(jié)論：GPR30在子宮肌瘤平滑肌瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿中高表達(dá)，可