子宮平滑肌瘤中AnnexinⅠ的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：本研究利用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，建立子宮平滑肌瘤組織及正常子宮肌層組織的二維電泳圖譜，篩選并鑒定子宮平滑肌瘤組織與正常子宮肌層組織間的差異表達(dá)蛋白并進(jìn)行表達(dá)水平的驗(yàn)證，以期望得到與子宮平滑肌瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)蛋白，為最終發(fā)現(xiàn)子宮平滑肌瘤治療標(biāo)靶提供重要信息。 方法：收集2006年5月-2007年9月在溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)婦女50例，取術(shù)后新鮮子宮平滑肌瘤標(biāo)本和距瘤旁2CM以上正常子宮肌層組織。所有肌瘤標(biāo)本均

2、經(jīng)病理學(xué)診斷為普通型子宮平滑肌瘤，所有正常肌層組織均經(jīng)病理學(xué)診斷為正常子宮肌層。取10例標(biāo)本提取總蛋白，采用雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)得到各組凝膠圖譜。采用PDQuest軟件進(jìn)行合成、對(duì)比和差異分析，識(shí)別子宮平滑肌瘤與正常子宮肌層之間差異表達(dá)蛋白點(diǎn)；選取差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，膠內(nèi)酶解后行肽指紋圖分析及網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫鑒定，鑒定差異蛋白質(zhì)。然后分別采用RT-PCR方法和免疫組織化學(xué)方法從mRNA水平和蛋白水平驗(yàn)證AnnexinⅠ在子宮平滑肌瘤和正常子

3、宮肌層的表達(dá)。 結(jié)果：建立了正常子宮肌層組織和子宮平滑肌瘤雙向凝膠電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)在至少5對(duì)組織中均有相同變化的差異點(diǎn)共有37個(gè)。與正常組織相比，在肌瘤組織中表達(dá)上調(diào)大于5倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)有10個(gè)(P＜0.05)，在肌瘤組織中表達(dá)下調(diào)大于5倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)有27個(gè)(P＜0.05)。 在此基礎(chǔ)之上，采用自動(dòng)凝膠采樣系統(tǒng)對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行自動(dòng)的采集，然后用特異性的胰酶消化蛋白質(zhì)，酶解后的肽段采用LCQDecaXP型高效液相色譜

4、.質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行質(zhì)譜分析。在37個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)中，11個(gè)蛋白點(diǎn)通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫的檢索得到了初步的鑒定。 對(duì)AnnexinⅠ蛋白的差異分析發(fā)現(xiàn)，在mRNA及蛋白水平上，正常子宮肌瘤組織AnnexinⅠ的表達(dá)顯著低于相應(yīng)肌瘤組織(P＜0.05)。 結(jié)論：本研應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法比較人子宮平滑肌瘤和正常子宮肌層間的差異表達(dá)蛋白，發(fā)現(xiàn)子宮平滑肌瘤組織和正常子宮肌層組織間存在蛋白質(zhì)表達(dá)的差異，對(duì)部分差異蛋白進(jìn)行了質(zhì)譜分析，