KLF4與NOTCH1在脫氧膽酸誘導BARRETT食管形成過程的影響.pdf

1、背景與目的
　　BE(Barrett esophagus, BE)是食管粘膜發(fā)生柱狀上皮化生的病理現象,也是食管腺癌(Esophageal adenocarcinoma,EAC)重要的癌前病變。近年來,腺癌的發(fā)病率迅速增加且致死率高,BE作為其主要的危險因素受到廣范重視。目前,對于反流性食管炎導致BE發(fā)生的細胞以及分子機制尚不清楚。BE的分子起源一直是研究的熱點問題,存在許多假說,都不能令人完全信服。
　　當前,細胞重編程對

2、疾病發(fā)生發(fā)展的影響逐漸引起人們的關注。簡單來說它就是成熟細胞的逆向分化。IPS(Induced pluripotent stem cells)細胞就是通過基因重編程直接轉變?yōu)榕咛ジ杉毎麡拥亩酀撃芗毎?是細胞重編程的經典案例。BE是柱狀上皮化生的現象,過去的研究證實,膽酸處理可使正常的食管鱗狀上皮表達腸干細胞標志物Cdx2,同時還表達Sox2、Bmp4等與細胞多潛能性有關的的細胞因子,由此,我們推測 BE是食管正常鱗狀上皮在胃食管反流物等

3、外界環(huán)境的刺激作用下經過細胞重編程直接轉化為具有多潛能性的細胞,然后再進一步分化為柱狀上皮而形成的。
　　Klf4,又稱作腸 Krüppel樣鋅指轉錄因子,它在體內外的內皮細胞均表達并且對于干細胞可塑狀態(tài)的維持也起十分重要的作用。Notch1是Notch信號通路的成員之一,該通路可以調控細胞的分化、增殖、凋亡等從而影響正常組織與細胞的生長,;同時它還參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展,如:乳腺癌,肝癌等。新近研究表明,Notch通路的活化在干

4、細胞自我更新以及分化過程中也發(fā)揮著重要調節(jié)作用,是細胞多能性的標志之一。本實驗以永生化的正常食管鱗狀上皮細胞為材料,用脫氧膽酸進行處理,模擬人體內BE的生成環(huán)境,旨在研究膽酸處理食管正常細胞過程中,Klf4和Notch1的表達變化情況;以及正常人食管,食管炎和 BE組織標本中兩者的表達情況,為闡明人類BE的發(fā)生提供全新的理論基礎。
　　研究方法:
　　1、人體標本的收集以及免疫組化染色。
　　選取重慶市西南醫(yī)院2012

5、年3月至2012年12月的97例消化科門診患者,其中26例患者診斷為食管炎和22例為BE,分別制作組織標本作為實驗組;再選取49例正常人的食管制作組織標本為對照組。采用免疫組織化學染色方法檢測所有標本中Klf4和Notch1的蛋白表達水平,利用SPSS18.0軟件進行對數據進行統(tǒng)計學分析,比較它們之間的關系。
　　2、培養(yǎng)永生化的正常食管鱗狀上皮細胞Het-1A,并用脫氧膽酸處理。
　　正常食管鱗狀上皮細胞Het-1A購自美

6、國ATCC菌種庫,以特殊上皮培養(yǎng)基培養(yǎng),在其過程中給予不同濃度(0μmol//l、100μmol/l、200μmol//l)的脫氧膽酸分別處理4、8、12小時,觀察其生長狀況。
　　3、 RT-PCR以及Western blot檢測。
　　采用 RT-PCR以及 Western blot的方法檢測不同濃度膽酸以不同時間點處理后的Het-1A細胞表達Klf4和Notch1的mRNA和蛋白表達水平,用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進

7、行數據處理。
　　結果:
　　1、蛋白Klf4在BE組織中表達最強,在食管炎組織中表達次之,在正常食管組織中表達最弱,其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);蛋白Notch1在三種人體組織中均有表達,但其表達率無統(tǒng)計學意義(P>0.05)
　　2、 Klf4的mRNA水平隨著脫氧膽酸處理的時間以及濃度呈線性升高,Notch1
　　的mRNA水平也隨著脫氧膽酸處理的時間以及濃度呈線性升高,各組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<

8、0.05)。與此同時,Klf4和Notch1的蛋白表達與mRNA表達也呈相同趨勢,即隨著脫氧膽酸處理的時間以及濃度逐漸升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論:
　　1、Klf4在食管炎及BE組織標本中表達逐漸增高,同時在細胞實驗中它的mRNA和蛋白水平隨著脫氧膽酸處理的時間以及濃度升高,提示Klf4可能在BE的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。
　　2、 Notch1在食管炎及BE組織標本中表達與正常組織相比雖無明