連翹酯苷的吸收及代謝研究.pdf

1、連翹為木犀科植物連翹（Forsythia suspens（Thunb.）Vah1）的干燥果實(shí)。味苦性寒，具有清熱解毒的功效，尤其對(duì)有病毒或細(xì)菌引起的上呼吸道感染有顯著地療效[1-2]。連翹中所含苯乙醇類成分具有保護(hù)肝臟、消退黃疸的功效，其苷元咖啡酸及結(jié)構(gòu)類似物綠原酸也均有護(hù)肝利膽作用。連翹酯苷（forsythiaside，F(xiàn)TA）屬于苯乙醇苷類且是連翹的主要有效成分之一。FTA和連翹苷通常被作為連翹藥材的主要質(zhì)控[3-5]及制備[6-7

2、]成分。文獻(xiàn)報(bào)道，F(xiàn)TA在青翹和老翹中的含量分別4-7％和0.8-3％[3-5]。近年來(lái)，對(duì)FTA的藥理作用的研究中，發(fā)現(xiàn)其具有抗菌[8]、抗病毒[10-11]、抗氧化[8-9]以及松弛血管[12]等生物活性，但對(duì)FTA的藥代動(dòng)力學(xué)研究甚少。本論文采用高靈敏度的LC-MS/MS技術(shù)，以整體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和體外細(xì)胞模型研究給予連翹酯苷后的藥代動(dòng)力學(xué)特性，包括其原型藥物成分的吸收及代謝產(chǎn)物的測(cè)定。闡釋FTA的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程和規(guī)律。
　　

3、首先，本文首次建立了高效、靈敏、穩(wěn)定可靠地LC-MS/MS分析方法測(cè)定FTA在大鼠血漿中的含量。本方法選用表兒茶精作為內(nèi)標(biāo)物，并采用固相萃取法作為樣品前處理方法。結(jié)果顯示，F(xiàn)TA在大鼠血漿中的濃度在2.0～50.0和50.0～5000.0ng/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性，并且此方法的最低檢測(cè)限和最低定量限分別為0.2和1ng/mL。同時(shí)呈現(xiàn)出了良好的精密度（RSD<10.8）和準(zhǔn)確度>91.9％，且提取回收率在81.3％～85.0％之間，

4、均達(dá)到生物樣品測(cè)定方法學(xué)的要求。
　　 其次，本文首次應(yīng)用已經(jīng)建立的LC-MS/MS分析方法，研究了FTA在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性。體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明大鼠口服FTA（100 mg/kg）后，達(dá)峰時(shí)間非常短（Tmax，20min），但其最大血藥濃度低（Cmax，122.2±45.4 ng/mL），并且在體內(nèi)消除快，靜脈和口服FTA后其t1/2，λz分別為76.8±26.5 min及74.7±13.3 min，其AUC0-t分

5、別為570.5±69.2μg min/mL及13.9±5.2μg min/mL。研究表明FTA的生物利用度很低，僅為0.5％。FTA機(jī)體穩(wěn)定性的研究結(jié)果顯示大鼠胃內(nèi)容物對(duì)FTA無(wú)明顯影響，而在小腸和大腸內(nèi)容物中FTA均有不同程度的降解，其中在大腸內(nèi)容物中降解最為明顯，其降解率為38.7％。并且在FTA pH環(huán)境穩(wěn)定性研究中發(fā)現(xiàn)FTA在酸性下穩(wěn)定，而在弱堿性和堿性條件易降解，從而表明在血漿和大腸中pH環(huán)境是引起FTA穩(wěn)定性下降的主要因素。

6、
　　 再次，本文首次建立了體外Caco-2細(xì)胞模型，并以此模型對(duì)FTA在人體腸壁吸收機(jī)理進(jìn)行研究，結(jié)果顯示：FTA透膜能力差，其表觀滲透系數(shù)（Papp）僅為1.2×10-7cm/s，屬于吸收不良的藥物，在Caco-2細(xì)胞模型上，不同濃度的FTA從AP→BL面和BL→AP面的Papp值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且其Papp值不會(huì)受藥物濃度的增加而改變而轉(zhuǎn)運(yùn)量卻會(huì)隨濃度的增加而增加。綜上所示，F(xiàn)TA在Caco-2單層細(xì)胞模型上，主要的轉(zhuǎn)運(yùn)方式

7、為被動(dòng)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　 第三，本文首次對(duì)FTA的排泄途徑進(jìn)行了研究。研究結(jié)果顯示，在靜脈給予大鼠FTA（20mg/kg）后，經(jīng)過(guò)11 h，尿液中累積排泄率為給藥量的12.7±4.6％，而在膽汁中經(jīng)過(guò)3 h的累積排泄率為給藥量的1.36±0.31％。結(jié)果表明，F(xiàn)TA從膽汁和尿液中原型的排泄量約占給藥量的15％，而其余藥物可能轉(zhuǎn)化為代謝物形式排出。
　　 最后，本文首次研究了FTA的代謝途徑，結(jié)果顯示FTA在膽汁中擁有較強(qiáng)的

8、代謝，利用LC-MS/MS中TIC模式和Product Ion模式鑒定出二相代謝物10種經(jīng)LC-MS分析，與空白樣品對(duì)比，在靜脈給藥后大鼠的尿樣和膽汁中找到了FTA原型及其10種代謝物，分別為FTA單甲基化產(chǎn)物M1（m/z637）；FTA雙甲基化產(chǎn)物M2（m/z651）；FTA甲基化和硫酸化代謝物M3、M4（m/z717、731）以及M3、M4的還原產(chǎn)物M5、M6（m/z719、733）；FTA甲基化和葡萄糖醛酸化產(chǎn)物M7、M8（m/z