褪黑素對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠凋亡蛋白Smac-DIABLO、XIAP mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討褪黑素(melatonin,MT)對(duì)重癥急性胰腺炎(severe acutepancreatitis,SAP)大鼠胰腺組織中Smac/DIABLO、XIAP mRNA表達(dá)的影響及可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.健康SD雄性大鼠54只,質(zhì)量200-250g,將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行完全隨機(jī)化的方法隨機(jī)分成3組:假手術(shù)組(sham operation,SO),重癥急性胰腺炎(severeacute pancrea

2、titis,SAP)組,褪黑素干預(yù)SAP組(MT pretreated,MS)。每組各18只,每組分3h、6h、12h三個(gè)時(shí)點(diǎn),每時(shí)點(diǎn)6只。
　　 2.采用逆行胰膽管注射法。SO組僅翻動(dòng)胰腺數(shù)次,SAP勻速注入3.5％脫氧膽酸鈉(0.1ml/100g),MS組在誘導(dǎo)SAP前30min經(jīng)腹腔注射MT(50mg/kg,0·1ml/100g),常規(guī)關(guān)腹,動(dòng)物造模后于背部皮下分點(diǎn)注射2.0mL無(wú)菌生理鹽水,補(bǔ)充水分。
　　 3.

3、各組大鼠分別于術(shù)后第3h、6h、12h(各組各時(shí)間點(diǎn)6只)經(jīng)下腔靜脈取血5-8ml,離心、留取上清液,并-20℃保存。迅速取出胰腺組織平均分為兩部分:一部分置于去RNA酶凍存管中,并于-80℃保存；一部分經(jīng)4％的多聚甲醛固定。心臟穿刺取血處死大鼠。SAP組大鼠在造模后第6-12h之間,死亡2只。
　　 4.血清淀粉酶檢測(cè),常規(guī)病理學(xué)觀察胰腺組織損傷,缺口末端標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)法檢測(cè)胰腺組織細(xì)胞凋亡,實(shí)時(shí)定量(Real-Tim

4、e)PCR分析胰腺組織中Smac/DIABLO、XIAP mRNA的表達(dá)。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,所有數(shù)據(jù)以(x)±s表示,進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析,采用t檢驗(yàn)、完全隨機(jī)設(shè)計(jì)單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：成功建立大鼠SAP模型。
　　 1.血清淀粉酶
　　 同SO組比較,SAP組和MS組血清淀粉酶增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

5、,證明模型制作成功；MS組血清淀粉酶各時(shí)點(diǎn)較SAP組相應(yīng)時(shí)點(diǎn)均下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.胰腺組織病理
　　 同SO組相比,MS組和SAP組胰腺組織均顯示不同程度的病理?yè)p害。同SAP組相比,MS組胰腺組織病理?yè)p傷較SAP組相應(yīng)時(shí)點(diǎn)減輕。
　　 3.胰腺組織細(xì)胞凋亡
　　 同SO組相比,MS組和SAP組細(xì)胞凋亡指數(shù)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同SAP組相比,MS組各時(shí)點(diǎn)細(xì)

6、胞凋亡指數(shù)均較SAP組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.Smac/DIABLO和XIAP mRNA表達(dá)
　　 SAP組胰腺組織中Smac/DIABLO mRNA表達(dá)逐漸下降。與SAP組相比,MS組Smac/DIABLO mRNA表達(dá)下調(diào)(P<0.05)。
　　 SAP組中XIAP mRNA表達(dá)逐漸升高。與SAP組相比,MS組XIAP mRNA表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。
　　 結(jié)論： MT