清胰Ⅱ號(hào)對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腺泡細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　通過(guò)建立SAP大鼠模型，采用EP干預(yù)，探討HMGB1介導(dǎo)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡途徑，并予清胰Ⅱ號(hào)干預(yù)觀察對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響，探索其對(duì)胰腺保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　方法：
　　將SD大鼠通過(guò)簡(jiǎn)單隨機(jī)（雌雄不限，200-250g，n=96）分為假手術(shù)組（A組，n=24）、SAP模型組（B組，n=24）、SAP+EP干預(yù)組（C組，n=24只）、SAP+清胰Ⅱ號(hào)干預(yù)組(D組，n=24只)。A組大鼠開(kāi)腹后僅翻動(dòng)腸管；

2、B組大鼠使用膽胰管逆行注入5％?；悄懰徕c（0.1ml/100g）的方法建立 SAP模型；A、B兩組使用和D組等量的生理鹽水灌胃；C組于制模蘇醒后腹腔注射EP溶液（40mg/kg,6小時(shí)一次）；D組大鼠于建模清醒后即用清胰Ⅱ號(hào)灌胃（10ml/kg,6小時(shí)一次）。將各組按不同時(shí)間點(diǎn)(6h、12h、24h)分為3個(gè)亞組（每亞組8只）。按時(shí)間點(diǎn)(6h、12h、24h)采大鼠靜脈血和取胰腺組織。光鏡觀察胰腺病理變化，并用Schimidt評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)

3、行病理評(píng)分；ELISA法測(cè)血清中HMGB1的濃度；RT-PCR法測(cè)胰腺組織Fasl mRNA和Bcl-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)；腺泡細(xì)胞的凋亡率使用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定；Western Blot檢測(cè)胰腺組織中HMGB1、TLR-4和NF-κB蛋白含量。并對(duì)各組檢測(cè)指標(biāo)作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　SAP模型組各時(shí)間點(diǎn)胰腺炎病理學(xué)評(píng)分較假手術(shù)組升高（P<0.05）。與A組比較：B組大鼠血清HMGB1濃度、胰腺組織HMGB1、TLR

4、4、NF-κB蛋白表達(dá)均升高（P<0.05），B組6h、12h時(shí)間點(diǎn)腺泡細(xì)胞的凋亡率及胰腺FasLmRNA表達(dá)均升高（P<0.05）。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，B組胰腺病理學(xué)評(píng)分、血清HMGB1濃度隨之升高（P<0.05），胰腺腺泡細(xì)胞凋亡率逐漸降低（P<0.05），胰腺組織中HMGB1、TLR-4、NF-κB蛋白表達(dá)6h到12h升高（P<0.05），12h到24h降低（P<0.05）。與B組比較：C和D組的胰腺炎病理學(xué)評(píng)分、血清HMGB1含量、腺

5、泡細(xì)胞的凋亡率、胰腺組織Bcl-2mRNA表達(dá)量、胰腺組織HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)水平均降低（P<0.05）；C、D組胰腺組織FasLmRNA、腺泡細(xì)胞凋亡率在各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均上升（P<0.05）。C組與D組比較：12h時(shí)腺泡細(xì)胞凋亡率、6h和24h胰腺組織HMGB1蛋白表達(dá)量、12h和24h胰腺組織TLR4蛋白表達(dá)較D組高（P<0.05），D組的6h和12h胰腺組織中 NF-κB蛋白表達(dá)量和6h胰腺組織中TLR4蛋

6、白表達(dá)較C組高（P<0.05）；各時(shí)間點(diǎn)胰腺炎病理學(xué)評(píng)分、胰腺組織Bcl-2mRNA和FasLmRNA表達(dá)、血清HMGB1濃度、6h及24h腺泡細(xì)胞的凋亡率、12h胰腺組織HMGB1蛋白表達(dá)、24h胰腺組織NF-κB蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)條件下，清胰Ⅱ號(hào)可增加胰腺腺泡細(xì)胞的凋亡，減輕胰腺損傷，其機(jī)制可能是通過(guò)降低血清中HMGB1濃度，阻礙HMGB1與TLR4結(jié)合，降低NF-κB蛋白